众文网1.我想写一篇关于大肠杆菌的论文,字数1500左右,应该从那些方面入手
0引言 脆性X综合征（fragile X syndrome, FXS）是一种最常见的遗传性智力发育不全综合征，有超过99%的FXS是由脆性X智障基因1(fragile X mental retardation, FMR1)中5′端非编码区CGG三核苷酸重复序列不稳定扩增及其CpG岛异常甲基化导致. FMR1基因的表达产物FMRP的缺乏导致FXS的发生[1-2]. 本实验对编码基因存在于3号染色体[3]，能与FMR1 基因5′ز d (CGG)nز3′重复序列特异性结合的蛋白CGGBP1进行原核表达，并对其DNA结合活性进行研究. 1材料和方法 1.1材料 大肠杆菌DH5α， BL21( DE3)和表达载体pRSET A均为本实验室保存. 质粒提取试剂盒购自Sigma公司； 限制性内切酶BamH I和KpnI购自宝生物工程公司；T4 DNA连接酶购自Promega公司； Ni2+زNTA金属螯合蛋白质纯化系统购自Qiagen公司；链酶亲和素磁珠购自Dynal公司；低分子质量蛋白标准购自上海西巴斯生物技术有限公司. 1.2方法 1.2.1表达载体的构建 根据CGGBP1基因起始密码子和终止子邻近序列设计PCR引物：CGGBP1F CGC GGA TCC GAG CGA TTG TAG TAA CAG CA,CGGBP1R GGG GTA CCT CAA CAA TCT TGT GAG TTG AG. 其上游及下游引物分别加入BamHI和KpnI酶切识别位点序列（引物序列下划线部分）. PCR反应以人淋巴细胞cDNA文库为模板，扩增编码CGGBP1的基因序列. 设计PCR扩增体系25 μL，灭菌去离子水10 μL,10*反应缓冲液2.5 μL,25 mmol/L MgCl2 2.0 μL,DMSO 2.5 μL,4* dNTP混合物（每种2.5 mmol/L）2 μL,CGGBP1F和CGGBP1R各10 pmol，模板3.5 μL(50 ng/μL), Taq DNA(5 μ/μL)聚合酶0.5 μL. 扩增条件：95℃预变性5 min，再94℃ 30 s, 53℃ 1 min,72℃ 1 min循环40次，最后72℃终末延伸产物10 min. PCR产物经琼脂糖电泳分离，用胶回试剂盒回收目的基因. 用BamHI和KpnI酶切PCR产物和pRSET A，酶切产物电泳后回收，在T4连接酶作用下，目的片段定向克隆至pRSET A的BamHI和KpnI克隆位点. 将重组质粒转入大肠杆菌DH5α，接种到含氨苄青霉素的LB培养基平板并挑取单菌落. 1.2.2融合蛋白的诱导表达 将测序正确的重组质粒转入BL21( DE3). 挑取携带目标质粒的单菌落接种于含100 mg/L氨苄青霉素的LB培养基中， 37℃振荡培养12 h， 按10 mL/L比例转接于新鲜培养基，37℃振荡培养至对数生长期时，加入IPTG至终浓度1 mmol/L,32℃诱导振荡培养4 h，离心收集菌体，SDSزPAGE分析重组蛋白的表达. 1.2.3蛋白表达形式的分析 取5 mL菌液离心，用500 μL的裂解液（10 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L磷酸二氢钠 pH 8.0）重悬，加溶菌酶至终浓度为1 mg/mL，冰浴30 min，超声波裂菌，离心后分别将上清和沉淀进行SDSزPAGE分析. 1.2.4融合蛋白的纯化 将1 mL 500 mL/L Ni2+زNTA悬液和4 mL细菌裂解上清液轻轻混匀4℃放置60 min，直接过柱. 过柱结束后，用4 mL漂洗液（20 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH 8.0），洗脱未和Ni珠结合的杂蛋白. 经过2次漂洗后再用0.5 mL洗脱液（250 mmol/L 咪唑，300 mmol/L NaCl及50 mmol/L 磷酸二氢钠 pH 8.0） 3次洗脱特异结合的目的蛋白，分步收集. 取收集液，进行SDSزPAGE分析. 1.2.5CGGBP1与（CGG）29重复序列双链DNA结合 实验取10 μL磁珠用1 mL的无RNA酶的三蒸水清洗磁珠2次，除去防腐剂. 1*生物素亲和素结合缓冲液（10 mmol/L TrisزHCl,2 mol/L NaCl,1 mmol/L EDTA,1 g/L Tween 20）15 μL重悬磁珠，各5 μL分3组实验. 其中一组加入25 μL(100 ng/μL)生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA，另外两组分别加入25 μL(100 ng/μL)非生物素化的（CGG）29重复序列双链DNA和25 μL三蒸水做对照；三组分别再加入2*生物素亲和素结合缓冲液30 μL,25℃轻摇1 h. 经磁力吸附后，弃上清. 重复上述步骤3次；加入纯化后CGGBP1(500 μg/mL)15 μL 和2*核酸蛋白结合缓冲液（20 mmol/L HEPES,100 mmol/L NaCl,0.5 mmol/L DTT,100 g/L甘油）20 μL，室温下静置30 min；经磁力吸附后，弃上清；用1*核酸蛋白结合缓冲液清洗磁珠2次；加三蒸水10 μL，沸水煮10 min，进行SDSزPAGE分析. 2结果 2.1原核表达载体的构建及鉴定 扩增产物在15 g/L的琼脂糖凝胶电泳，可观察到一条约504 bp的条带（图1）； 重组质粒pRSET A/CGGBP1及质粒pRSET A分别用BamHI和KpnI酶切，pRSET A/CGGBP1分为两个片段，分别为2.9 ku和504 bp（图2），均与预计结果相同. 2.2CGGBP1的表达 用BamHI和KpnI双酶切pRSET A/CGGBP1表达质粒，筛选阳性重组质粒. 携带有pRSET A/CGGBP1质粒的E.coli BL21(DE3)菌株，经IPTG诱导后，在Mr 约25 000处出现1条表达条带；而未经IPTG诱导的菌体则无此条带. 诱导后的菌体经溶菌酶及超声波裂解，离心后分为上清和沉淀两部分. 经SDSزPAGE分析表明，CGGBP1部分存在于细菌裂解液的上清中，为可溶性蛋白，上清液中的目标蛋白相对较少（图3）. 2.3CGGBP1蛋白纯化 在表达质粒pRSET A多克隆酶切位点的上游， 插入有连续6个组氨酸的序列 —（His ）6 tag. 重组质粒经诱导表达后，（His ）6 tag可以和外源插入片段共同表达. 利。
2.粪大肠菌群
粪大肠菌群是大肠菌群的一种，又名耐热大肠菌群 粪大肠菌群是生长于人和温血动物肠道中的一组肠道细菌，随粪便排出体外，约占粪便干重的1/3以上，故称为粪大肠菌群。
受粪便污染的水、食品、化妆品和土壤等物质均含有大量的这类菌群。若检出粪大肠菌群即表明已被粪便污染。
大肠菌群 1、大肠菌群是指一群好氧及兼性厌氧，在37℃、24h能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌，它主要来源于人畜粪便，通常可作为水体粪便污染的指标菌大肠菌群 2、大肠菌群是指37℃生长时能发酵乳糖，在24h内产酸产气的革兰阴性无芽孢杆菌，除包括大肠埃希氏杆菌属外，还包括肠杆菌科的肠杆菌属、枸椽酸菌属、克雷伯菌属 3、大肠菌群是指一群能在36℃，24h内发酵乳糖产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰阴性无芽胞杆菌.它主要包括肠杆菌科的大肠埃希氏菌、枸椽酸杆菌、克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌 文献来源 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。 大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
粪大肠菌群和饮用水 国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每mL不超过100个。 青岛第一海水浴场粪大肠菌群超标 青岛第一海水浴场粪大肠菌群超标环保总局公布了上周全国16个沿海城市28个海水浴场的水质报告。
报告显示，青岛的第一海水浴场因粪大肠菌群超过2000个/升，水质差，不适宜游泳。粪大肠菌群检测方法 粪大肠菌为总大肠菌群的一个亚种；直接来自粪便，除了它耐热，在44-44.5℃的高温条件下仍可生长繁殖并将色氨酸代谢成吲哚，其他特性均与总大肠菌群相同。
总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在自然环境中生活的大肠菌群培养的最合适温度为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如将培养温度再升高至44.5℃，则不再生长，而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃左右生长，如将培养温度升高至44.5℃仍可继续生长。因此，可用提高培养温度方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分。
在37℃培养生长的大肠菌群，包括在粪便内生长的大肠菌群称为“总大肠菌群”（Total coliform）；在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为“粪大肠菌群”（Fecal coliform），粪大肠菌群细菌在卫生学上具有重要的意义。 1.5检验注意事项 （1）将接种好的样品放人恒温水浴箱或隔水式恒温培养箱时，箱内温度一定要求达到所要求的温度（44±1℃）时，方可放入。
如用恒温水浴箱其水面要高于接种物面，放滤膜的培养皿要沉到水浴箱底部。 （2）MFC培养基中苯胺蓝的纯度和质量往往影响菌落的颜色，根据试验结果用进口苯胺蓝加O.1g，用国产苯胺蓝加0.2g，培养出的粪大肠菌菌落颜色较典型。
但国产苯胺蓝的性能是否同样稳定尚不能肯定。因此，制好的培养基在使用前，最好先接种典型粪大肠菌，以观察对比菌落的颜色。
玫红酸高压后会分解，配好的试液应在2-lO℃保存不超过2周，如颜色由暗红变成棕色沉淀时应弃去。如杂菌污染少，且加与不加玫红酸对菌落计数无影响时，可不加。
. （3）在滤膜上生长的菌落除挑取蓝色菌落外，浅蓝色菌落或浅蓝色中心较深的菌落也应挑取。 （4）生活饮用水通常都是经氯处理消毒的，水中含有一定量的余氯，使大肠菌群处于受损或受抑制状态，在采集水样时应加硫代硫酸钠脱氯，使此受损的细菌得以复苏与修复，从而避免计数结果偏低甚至假阴性出现。
（5）采样后水样的正确保存很重要，如保存不当可使检样中的大肠菌群细菌死亡或在一定条件下再生长，这些都将影响检验结果的准确性。检验室接到水样后，应立即检验。
如因故不能检验时，应立即置于冰箱内并于2小时内检验。 关于水样储存时间与温度对大肠菌群数的影响，Lonsans等报告认为水样中大肠菌群数不多时，则冰箱保存与室温保存相差不大；如水样中菌数多时，则在室温（23-39.5℃）内保存比在冰。
3.大肠杆菌耐药影响因素研究为题目的论文怎么写,开题报告又怎么写
一、开题报告的含义与作用 课题负责人在调查研究的基础上撰写的报请上级批准的选题计划。它主要说明这个课题应该进行研究，自己有条件进行研究以及准备如何开展研究等问题，也可以说是对课题的论证和设计。开题报告是提高选题质量和水平的重要环节。 研究方案，就是课题确定之后，研究人员在正式开展研之前制订的整个课题研究的工作计划，它初步规定了课题研究各方面的具体内容和步骤。研究方案对整个研究工作的顺利开展起着关键的作用，尤其是对于我们科研经验较少的人来讲，一个好的方案，可以使我们避免无从下手，或者进行一段时间后不知道下一步干什么的情况，保证整个研究工作有条不紊地进行。可以说，研究方案水平的高低，是一个课题质量与水平的重要反映。二、写好研究方案应做的基础性工作 写好研究方案一方面要了解它们的基本结构与写法，但“汝果欲学诗，功夫在诗外”，写好开题报告和研究方案重要还是要做好很多基础性工作。首先，我们要了解别人在这一领域研究的基本情况，研究工作最根本的特点就是要有创造性，熟悉了别人在这方面的研究情况，我们才不会在别人已经研究很多、很成熟的情况下，重复别人走过的路，而会站在别人研究的基础上，从事更高层次、更有价值的东西去研究；其次，我们要掌握与我们课题相关的基础理论知识，理论基础扎实，研究工作才能有一个坚实的基础，否则，没有理论基础，你就很难研究深入进去，很难有真正的创造。因此，我们进行科学研究，一定要多方面地收集资料，要加强理论学习，这样我们写报告和方案的时候，才能更有把握一些，制定出的报告和方案才能更科学、更完善。 三、课题研究方案的结构与写法 课题研究方案主要包括以下几个方面： （一）课题名称 课题名称就是课题的名字。这看起来是个小问题，但实际上很多人写课题名称时，往往写的不准确、不恰当，从而影响整个课题的形象与质量。这就是平常人们所说的“只会生孩子，不会起名字”。那么，如何给课题起名称呢？ 第一，名称要准确、规范。 准确就是课题的名称要把课题研究的问题是什么，研究的对象是什么交待清楚，课题的名称一定要和研究的内容相一致，不能太大，也不能太小，要准确地把你研究的对象、问题概括出来。 规范就是所用的词语、句型要规范、科学，似是而非的词不能用，口号式、结论式的句型不要用。因为我们是在进行科学研究，要用科学的、规范的语言去表述我们的思想和观点。课题就是我们要解决的问题，这个问题正在探讨，正开始研究，不能有结论性的口气。 第二，名称要简洁，不能太长。 不管是论文或者课题，名称都不能太长，能不要的字就尽量不要，一般不要超过20个字。这次各个学校课题申报表中，我看名称都比较简洁，我就不再多说了。 （二）课题研究的目的、意义 研究的目的、意义也就是为什么要研究、（三）本课题国内外研究的历史和现状（文献综述）。 规范些应该有，如果是小课题可以省略。 四、注意三点： 1、要学会搜集和获取信息。处处留心皆学问（积累）。 2、要多学习，多借鉴。集思广益开眼界（学习与借鉴）。 3、创新。登高望远多创意（创新）。本文来自： 专业毕业设计网（） 详细出处参考： 更多毕业设计，毕业论文知识，请登陆 察看
4.关于环保的论文
加强农村生态环境保护与建设□卓吉华重庆农村环境问题同全国一样令人堪忧，传统粗放发展模式在一定程度上已经成为新农村建设的最大约束。
特别是农药、化肥、农膜的不合理使用，禽兽和水产养殖污染，农村生活垃圾和生活污水以及乡镇企业污染，不仅直接威胁着人们的生存环境和身体健康，而且制约了农村经济的进一步发展。所有这些问题，都务必引起有关方面的关注和解决。
一、重庆农村生态环境存在的主要问题（一）畜禽和水产养殖污染较为严重。据调查，全市畜禽养殖规模换算成生猪当量约3570万头，其中，猪年出栏近2000万头，家禽年出栏2.38亿只。
年产畜禽粪尿总量近7500万吨，进入水体的COD（化学需氧量）、NH3~N（氨氮）和TP（总磷）分别为22.4万吨、2.48万吨和1.35万吨，其中畜禽粪尿产生的COD（化学需氧量）污染负荷与全市工业和生活废水的COD（化学需氧量）排放量相当。2005年长江、嘉陵江和乌江所有34个监测项目中，只有粪大肠菌群、石油类和总磷3项超标，其中粪大肠菌群超标率为90.9%，石油类和总磷仅在个别断面出现超标。
目前，畜禽养殖污染在梁滩河、花溪河等已大大超过流域内城镇生活废水的污染负荷，成为这些流域水质恶化的主要原因。肥水网箱、网拦养鱼造成水质下降，并在局部地区超过水环境容量，导致水库富营养化问题日趋严重，成为农村环境质量下降的又一重要影响因素。
（二）农药、化肥污染比较突出。大量农药、化肥不合理施用，作物秸秆、畜禽粪便、废旧农膜等农业废物污染，造成农村农业面源污染加重。
2004年全市化肥施用量63.3万吨，化肥的增加率远高于粮食的增产率；农药施用量2837吨（其中杀虫类和杀菌剂占94.2%），农用薄膜使用量2.53万吨。其中，氮肥施用量为220公斤/公顷，高于全国平均水平，每年约2700吨废旧农膜残留于耕地中。
此外，土壤受重金属污染的影响范围也已由过去的城郊区域扩展到农村地区。（三）农村饮用水安全保障程度低。
全市农村饮用水安全人口1082.11万人，仅占农村饮水总人口的44.65%。水质超标和水质污染导致饮水不安全人口高达599.11万人、337万人，其中32.08万人饮用高氟水，27.1万人饮用苦咸水，饮用铁锰及硬度超标人口168.39万人，饮用硫酸盐超标人口32.12万人。
水源保证率不达标人口220,63万人，用水量不达标人口249.83万人，用水方便程度低人口271.63万人，无供水设施人口806.56万人。饮用水不安全，使群众身体健康受到严重威胁，甲型肝炎发病率略高于全国平均水平，一些村成为肝病、结石、皮肤病的高发地区。
（四）农村环境卫生差，垃圾、生活污水污染突出。居住环境没有实行人畜分离，没有统一的垃圾堆放点和处理场所，也没有得到有效处理。
垃圾、污水处理设施跟不上农村居民的集聚发展，环保基础设施建设和环境管理落后于经济和城镇化发展。现有小城镇污水处理和垃圾处理项目单位投资和运行费用高，无法维持正常运行，特别是三峡库区区县多为国家级贫困县，建设污水处理厂，“建不起、更用不起”的矛盾十分突出。
（五）乡镇企业环境污染较为普遍。乡镇企业集中程度低，技术落后，大多数缺乏环保处理设施，规模效益差，给农村生态环境带来了严重的污染。
根据对三峡库区和渝西地区18个小城镇调查，其企业类型主要是煤矿、水泥、机砖、铸造、皮革、农副产品加工等资源利用型，环境污染和生态破坏十分严重。（六）生态系统功能衰退，水土流失严重。
森林资源总量不足，资源分布不均，林种和林龄结构不合理，退耕还林政策中经济林比例较低，林地生态系统脆弱，稳定性差。全市水土流失面积3.56万平方公里，占幅员面积43.3%，年土壤侵蚀总量为1.34亿吨，进入江河的泥沙总量达1.0亿吨。
水土流失加速了土地退化和“石漠化”。仅渝东南地区石漠化面积3125平方公里，占渝东南地区幅员面积的8.02%，加重了旱灾的发生率。
（七）生物多样性受到较大威胁。农村人口增加，人地矛盾突出，加大了对资源的掠夺和环境的破坏；使用农药以及大量污染物排放，不少物种的栖息地发生剧烈改变，使生态脆弱区域的物种受到威胁，不少资源逐渐处于濒危状态甚至消失绝迹。
而环境的改变，又为外来入侵种的生存和扩展提供了空间。（八）矿产资源开发、交通工程建设加剧农村生态破坏。
一方面，地表失稳、地表水资源失衡、水质污染，水土流失与泥石流，以及土地资源的理化结构和生产力造成的严重破坏等。另一方面，公路建设环保措施不到位，造成局部区域植被破坏、水土流失等生态问题。
二、重庆农村生态环境问题的原因分析一是农村经济发展水平低。由于基础条件差，基础设施落后，产业发展水平低，粗放型经济发展模式加大了农村环境压力；全市农业人口多，人均收入低，人均国内生产总值只相当于全国平均水平的48%，自我发展能力弱；全市平均垦殖率31%，超过全国平均水平13.9%的一倍多，不利的自然环境条件加大了重庆农村环境污染治理的难度。
二是农村环境保护缺乏充足资金投入和政策支持。长期以来，农村环境保护社会整体投入不足，大多数乡镇没有生活污水和垃圾处理。