众文网1.求一篇有关绿色荧光蛋白研究的毕业论文
【关键词】 树突状细胞；绿色荧光蛋白；RNA；转染 Effect of dendritic cells transfected with total RNA of HepG2 cell line using GFP marker in vitro 【Abstract】 AIM: To investigate the feasibility of GFP as a marker to observe the dendritic cells (DCs) transfected with total RNA of tumor cells and the feasibility of the transfected DCs serving as a vaccine for potential immunotherapy. METHODS: Plasmid pGFPC3 was transfected into HepG2 stably. Total RNA was extracted from the HepG2GFP using Trizol; DCs were induced by liver cancer patients peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), and transfected with the total RNA. The effect of transfection was observed by a fluorescence microscope, the changes of phenotype were detected by flow cytometry, and the change of IL12 secretion in the supernatant of DCs was detected by ELISA assay. The cytotoxic effect of CTLs was assessed by MTT assay. RESULTS: GFP was expressed stably in the HepG2GFP cells that presented green fluorescence under a fluorescence microscope, so did DCs transfected with total HepG2GFP cell RNA. After transfection, the expression of membrane molecules such as CD80 (13.2% to 86.7%), HLADR (38.9% to 97.9%), CD83 (0.9% to 97.1%), CD86 (31.2% to 92.5%) was increased dramatically, IL12 secretion in the supernatant was elevated significantly 〔（61.3±8.1） ng/L to (287.4±29.3) ng/L, P 【Keywords】 dendritic cell;green fluorescent protein;RNA;transfection 【摘要】 目的：探讨GFP作为标记观察肝癌细胞RNA转染DCs效果的可行性及肿瘤细胞RNA转染DCs制备疫苗的可行性. 方法：绿色荧光蛋白质粒载体 pGFPC3稳定转染肝癌细胞HepG2,Trizol法提取筛选后细胞HepG2GFP总RNA；分离肝癌患者外周血单核细胞体外诱导DCs细胞，总RNA转染DCs，荧光显微镜下观察转染效果，流式细胞仪检测转染前后DCs表型变化；ELISA法检测转染前后上清中IL12变化情况；MTT法检测效应细胞对靶细胞的杀伤率. 结果：pGFPC3稳定转染肝癌细胞HepG2后可得到稳定表达GFP的细胞HepG2GFP，荧光显微镜下呈绿色荧光；总RNA转染的DCs荧光显微镜下呈绿色荧光，CD80(13.2%上升至86.7%),HLADR(38.9%上升至97.9%),CD83(0.9%上升至97.1%),CD86(31.2%上升至92.5%)表达明显升高，上清IL12分泌量ng/L显著增高（61.3±8.1→287.4±29.3,P 【关键词】 树突状细胞；绿色荧光蛋白；RNA；转染 【中图号】 R739.41 0引言 肝细胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是一种常见的恶性肿瘤，适合手术治疗的患者只占一少部分，具有较高的复发率，预后很差，严重威胁人类健康〔1〕. DCs(dendritic cells, DCs)是体内功能强大的专职性抗原提呈细胞，它能够高效的摄取、处理抗原，并将处理后的多肽呈递给静息型T细胞，引起针对该抗原的特异性免疫反应〔2〕. 国内外类似的研究中，都没有明确的可以观察肿瘤RNA转染DCs效果的指标，我们应用绿色荧光蛋白质粒载体 pGFPC3稳定转染肝癌细胞HepG2，提取筛选后细胞HepG2GFP总RNA转染DCs，观察转染后DCs绿色荧光蛋白表达及特异性表面标志及功能相关分子表达，检测其上清细胞因子分泌，探讨其作为肿瘤疫苗的可行性. 1材料和方法 1.1材料肝癌患者外周血单个核细胞来源于我科造血干细胞移植患者；HepG2肝癌细胞株由我科常规传代培养. 流式细胞仪（BD）,DG3022A型酶联免疫检测仪（华东电子管厂），荧光显微镜Optiphot XIF(Nicon)等均为我院常备. FITCCD80,FITCHLADR,PECD83,PECD86抗体购自BD公司；rhGMCSF,rhIL4购自Peprorotec公司；TNFα购自我校生物技术中心；绿色荧光蛋白载体pGFPC3由陕西省肿瘤医院贾军博士惠赠；脂质体Transfection2000,Trizol Reagent购自Invitrogen;RPMI 1640培养基、胎牛血清、G418购自Gibco公司，Xvivo无血清培养基购自BioWhittaker;IL12 ELISA检测试剂盒购自Bioscience公司；MTT购自Sigma公司. 1.2方法参照Transfection2000说明书，pGFPC3转染HepG2,G418筛选2 mon. 筛选细胞命名HepG2GFP，荧光显微镜下观察. Trizol试剂提取HepG2GFP总RNA，紫外灯下观察，-80℃冻存备用. 同样方法提取HepG2总RNA. 取肝癌患者造血干细胞分离液，贴壁法分离单核细胞，贴壁细胞在细胞因子rhGMCSF,rhIL4作用下，诱导DCs. 倒置显微镜、电子显微镜观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表型. 1.2.1转染树突状细胞收集培养4 d的DCs，转入6孔板，转染HepG2GFP总RNA. 另设转染HepG2总RNA及空白对照组. 继续培养48 h. 荧光显微镜下观察. 1.2.2细胞因子分泌的测定48 h后，收集各组DCs上清，ELISA法检测转染前后各组细胞上清中IL12分泌量. 1.2.3CTL效应收集各组DCs,30 Gy 60Co照射后与复苏冻存的非贴壁细胞按20∶1比例混合接种于24孔板，培养5 d，收集的细胞即为效应细胞. 收集对数生长期的HepG2细胞作为靶细胞，将效应细胞与靶细胞按20∶1比例混合接种于96孔板. 同时设单一靶细胞组。
2.量子点的自组转方法（综述）
量子点（quantum dot）是准零维（quasi-zero-dimensional）的纳米材料，由少量的原子所构成。粗略地量子点说，量子点三个维度的尺寸都在100纳米（nm）以下，外观恰似一极小的点状物，其内部电子在各方向上的运动都受到局限，所以量子局限效应（quantum confinement effect）特别显著。由于量子局限效应会导致类似原子的不连续电子能级结构，因此量子点又被称为「人造原子」（artificial atom）。科学家已经发明许多不同的方法来制造量子点，并预期这种纳米材料在二十一世纪的纳米电子学（nanoelectronics）上有极大的应用潜力。 量子点（英语：Quantum Dot）是在把导带电子、价带空穴及激子在三个空间方向上束缚住的半导体纳米结构。这种约束可以归结于静电势（由外部的电极，掺杂，应变，杂质产生），两种不同半导体材料的界面（例如：在自组量子点中），半导体的表面（例如：半导体纳米晶体），或者以上三者的结合。量子点具有分离的量子化的能谱。所对应的波函数在空间上位于量子点中，但延伸于数个晶格周期中。一个量子点具有少量的（1-100个）整数个的电子、空穴或空穴电子对，即其所带的电量是元电荷的整数倍。 小的量子点，例如胶状半导体纳米晶，可以小到只有2到10个纳米，这相当于10到50个原子的直径的尺寸，在一个量子点体积中可以包含100到100,000个这样的原子.自组装量子点的典型尺寸在10到50 纳米之间。通过光刻成型的门电极 或者刻蚀半导体异质结中的二维电子气形成的量子点横向尺寸可以超过100纳米。将10纳米尺寸的三百万个量子点首尾 相接排列起来可以达到人类拇指的宽度。 量子点，又可称为纳米晶，是一种由II-VI族或III-V族元素组成的纳米颗粒。量子点的粒径一般介于1~10nm之间，由于电子和空穴被量子限域，连续的能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，受激后可以发射荧光。基于量子效应，量子点在太阳能电池，发光器件，光学生物标记等领域具有广泛的应用前景。
3.上转换发光纳米粒子为什么无生物背景荧光
上转换发光纳米粒子为什么无生物背景荧光
半导体量子点（QDs）是一种有 II-VI 族或 III-V 族元素组成的、粒径小于或接近于激子波尔半径的纳米颗粒，具有特殊的物理和化学性质，如量子尺寸效应、比表面积效应、量子隧道效应等，从而表现出尺寸依赖的荧光性质。与传统的有机染料相比，量子点具有独特的光学性质和生物特性：如激发波长范围宽而发射波长范围窄且对称，重叠小；量子点可根据尺寸大小来调节其发射波长；量子点的荧光强度和稳定性比染料要高，光漂白现象比染料要小；同时修饰后的量子点也具有一定的生物相容性，可以进行特异性连接，能进行生物活体标记和检测。量子点作为一种新型的荧光探针在生物分子检测、细胞荧光成像、多色标记等研究领域中发挥了重要的作用。
尽管量子点具有众多的优点，在生物荧光标记也得到了快速发展。但是其稳定性、生物毒性是目前一直没有解决的问题。和荧光染料一样，量子点通常也需要高能量的紫外光或者是可见光作为激发光源，从而带来明显的缺点是较低的组织穿透能力、生物组织破坏性和生物组织自发荧光干扰等。
稀土上转换发光材料是一种在近红外光激发下能发出可见光的发光材料，即可通过多光子机制把长波辐射转换成短波辐射，所以称之为“上转换”。其最大的特点是材料所吸收的光子能量低于发射的光子能量。
4.上转换发光材料的上转换过程及其机理
其原理有激发态吸收（ESA）、能量传递上转换（ETU）和光子雪崩（PA）三种。
能量传递是指通过非辐射过程将两个能量相近的激发态离子藕合，其中一个把能量转移给另一个回到低能态，另一个离子接受能量而跃迁到更高的能态。能量传递上转换可以发生在同种离子之间，也可以发生在不同的离子之间。
因此，能量传递上转换可以分为两类：（a） 连续能量传递 如图2-2所示，为连续能量传递上转换示意图。处于激发态的施主离子通过无辐射跃迁返回基态，将能量传递给受主离子，从而使其跃迁至激发态，处于激发态的受主离子还可以通过此能量传递跃迁至更高能级，从而跃迁至基态时发射出更高能量的光子。
图2-2 连续能量传递过程 上转换纳米颗粒通常由无机基质及镶嵌在其中的稀土掺杂离子组成。尽管理论上大多数稀土离子都可以上转换发光，而事实上低泵浦功率（10W/cm2）激发下，只有，和作为激活离子时才有可见光被观察到，原因是这些离子具有较均匀分立的能级可以促进光子吸收和能量转移等上转换所涉及的过程。
为了增强上转换效率，通常作为敏化剂与激活剂一同掺杂，因其近红外光谱显示其有较宽的吸收域。作为一条经验法则，为了尽量避免激发能量因交叉弛豫而造成的损失，在敏化剂-激活剂体系中，激活剂的掺杂浓度应不超过2%。
上转换过程的发生主要依赖于掺杂的稀土离子的阶梯状能级。然而基质的晶体结构和光学性质在提高上转换效率方面也起到重要作用，因而基质的选择至关重要。
用以激发激活离子的能量可能会被基质振动吸收。基质晶体结构的不同也会导致激活离子周围的晶体场的变化，从而引起纳米颗粒光学性质的变化。
优质的基质应具备以下几种性质：在于特定波长范围内有较好的透光性，有较低的声子能和较高的光致损伤阈值。此外，为实现高浓度掺杂基质与掺杂离子应有较好的晶格匹配性。
综上考虑，稀土金属、碱土金属和部分过渡金属离子（如 ，和）的无机化合物可以作为较理想的稀土离子掺杂基质。表1列出了常用于生物学研究的上转换材料基质。
尽管目前UC颗粒已有许多合成方法，为了得到高效的UC发光产品，许多研究仍致力于探寻合成高晶化度的UC颗粒。具有较好晶体结构的纳米颗粒，其掺杂离子周围有较强的晶体场，且因晶体缺陷而导致的能量损失较少。
考虑到生物领域的应用，为与生物（大）分子结合，纳米颗粒应同时具备小尺寸和良好分散性的特点。传统的合成上转换纳米颗粒的方法中，为了得到高晶化度、高分散度、特定的晶相和尺寸的产物，总体上对反应条件有较高的要求，如高温和长反应时间，而这可能导致颗粒的聚集或颗粒尺寸变大。
对此，我们最近研究找到了较温和的反应条件，在此条件下合成的纳米颗粒有小尺寸和较好的光学性质。严格控制掺杂浓度，还可以得到不同晶相和尺寸的纳米颗粒，这一事实在最近Yu的文献中得到了证实。
稀土离子的吸收和发射光谱主要来自内层4f电子的跃迁。在外围5s和5p的电子的屏蔽下，其4f电子几乎不与基质发生相互作用，因此掺杂的稀土离子的吸收和发射光谱与其自由离子相似，显示出极尖锐的峰（半峰宽约为10~20nm）。
而这同时就对激发光源的波长有了很大的限制。幸运的是，商业化的980nm InGaAs二极管激光系统恰巧与的吸收相匹配，为上转换纳米颗粒提供了理想激发源。
镧系金属离子通常有一系列尖锐的发射峰，因此为光谱的解析提供了特征性较强的图谱，避免了发射峰重叠带来的影响。发射峰波长在根本上不受基质的化学组成和物理尺寸的影响。
通过调节掺杂离子的成分和浓度，可以控制不同发射峰的相对强度，从而达到控制发光颜色的目的。与传统的反斯托克斯过程（如双光子吸收和多光子吸收过程）不同，上转换发光过程是建立在许多中间能级态的基础上的，因此有较高的频率转换效率。
通常，上转换过程可以由低功率的连续波激光激发，而与之鲜明对比的是“双光子过程”需要昂贵的大功率激光来激发。由于内层4f电子跃迁的上转换发光过程不涉及到化学键的断裂，UC纳米颗粒因而具有较高的稳定性而无光致褪色和光化学衰褪现象。
许多独立的研究表明，稀土掺杂的纳米颗粒在经过数小时的紫外光和红外激光照射后并未有根本的变化。UC纳米颗粒的上转换发光具有连续性，而不会出现“闪光”现象。
虽然单个离子会观测到“闪光”，而由于UC纳米颗粒中含有大量稀土离子，近期实验已经证实在连续的红外激光激发下其UC纳米颗粒不会出现“闪光”现象。由于f-f电子跃迁禁阻，三价稀土金属离子通常具有长发光寿命。
时控发光检测技术即利用了这个光学特性，能够尽量避免因生物组织、某些有机物种或其它掺杂物的多光子激发过程而产生的短寿命背景荧光的干扰。与传统的稳定态发光检测技术相比，由于信号/噪声比显著增大，其检测灵敏度大大提高。
5.毕业论文设计题目〈光电显示器件应用的现状及展望〉,急需,6000字
1 光电显示技术
1.1 CRT（阴极射线管）
1）产量/产值
1999年2.5亿只/240亿美元
2000年2.6亿只/240亿美元
2001年2.74亿只/250亿美元
2）发展趋势：大屏幕及全平面化；数字式HDTV，超高分辨率；高亮度，高对比度.
1.2 LCD（液晶显示）
LCD产品及技术
(1)α-Si TFT-LCD生产线
分辨率从VGA(640*480) XGA(1024*768)到SXGA(2048*1536)
亮度从300cd/m2到1600cd/m2
(2)研究多晶硅P-Si生长技术及机理.
(3)研究铁电液晶电光效益、开关特性和灰度关系，以期实现连续调制灰度级的方案，实现全
色显示
(4)研制高密度小尺寸TFT-LCD
(5)研制反射式彩色液晶显示技术
1.3 PDP（等离子显示）
1）原理：由气体放电时发射的紫外线激励光致发光荧光粉，由荧光粉发光实现彩色显示.
2）特点：
(1)适用于42英寸到61英寸的大屏幕显示
(2)高亮度（大于500cd/m2），高对比度（400∶1）
(3)宽视角（大于160°）
(4)响应速度快
(5)彩色还原接近于CRT
1.4 FED（场致发射显示）
1）特点：集CRT和一切FPD的优点于一体：高亮度、宽视角、彩色还原好，适用于HDTV，功
耗及体积小
2）技术关键：
(1)微针电极材料低脱出功，以降低工作电压，理化特性稳定，成本低.钨、铂、硅、金刚石等
(2)微针电极结构碳薄膜，金属-介质-金属夹层结构等
(3)封装工艺技术
3）产品：目前有15英寸彩色FED(Sumsung)，成为真正产品仍需研究探索
1.5 投影显示
1) HDTV大屏幕显示的首选方案
2）投影显示技术分类：
(1) CRT
(2) TFT-LCD（透射式）
(3) LCOS（反射式）
(4) DLP
3）市场：
(1) 2000全球228万台，LCD及DLP共80万台
(2) 2000中国20万台
(3) 2005中国50~100万台
1.6 TFT-LCD投影器
1）当前教学和商业用投影器的主流产品
2）进入家庭用，大屏幕HDTV要大大降低制造成本
3）规格
(1)芯片直径44mm，分辨率1280*1029，光输出300lm
(2)芯片直径29.4mm，分辨率1280*720
1.7 LCOS（硅片微显示器）
1）原理
(1) DMD象素尺寸16μm,40万象素以上.
(2)微镜取向寻址.
2）特点
(1)高亮度，三片DMD可达10000lm输出
(2)高分辨率，最高2020*1280
(3)响应快
3）技术关键
DMD制作
1.8 小 结
1) CRT的性价比高于所有FPD，其优势可持续到2020年
2) PDP TFT-LCD，已经进入工业化生产，需大幅度降低成本
3) LCOS要走出实验室，进行生产技术的研发
4) FED OLED等是将来的技术
给的分值只能查到这么多，需要关键词
6.求“荧光蛋白在生命科学研究中的应用”论文材料~
1、绿色荧光在建立基因转化技术及在研究基因表达方面的应用，绿色荧光在各种异源细胞中表达后均可检测到荧光的发射，且对寄主细胞不存在毒性。2、GFP在基因产物及基因定位研究中的应用，GFP在接上各种细胞内定位序列（localization sequence）后，在活体中可直接观察各种亚细胞结构及其生活动态，已有大量实验报道表明GFP可定位到细胞核、线粒体、内织网、质膜及核膜孔等。各种基因突变体的产生（蛋白变小，光强增加）也使得定位在很小区域内的GFP能很灵敏的检测到。3、3在研究病原物与宿主相互关系中的应用，关于病毒感染的检查及定位的研究目前主要采用的方法有组织印渍法（（tissue printing）、放射性标记的核酸探针法及gus等报告基因引人病毒基因组作为报告物等，但这些方法都必须在分析前对组织进行处理，这样就阻止了感染的继续进行。GFP的出现可有效地克服这一弊端，从而建立起一种非破坏性的检测方法（non-destructive assaytechnique），用它来跟踪病原物对宿主的感染途径，研究病原物与宿主的相互关系，药物的作用情况等。
GFP在转基因动物的研究中可用来标记目的基因、筛选阳性胚胎、建立荧光动物模型；在细胞生物学研究中可用来对细胞的生理过程进行监控、对细胞亚结构及蛋白质分子的定位、研究细胞内蛋白质的动力学、对目的蛋白的定量分析、观察细胞内酶的活动、细胞的示踪研究；在环境微生学研究中可用来研究微生物降解污染物的过程、研究生物膜和活性淤泥菌、研究植物与根际微生物间的相互作用、观察微生物对土壤修复、环境监测用生物传感器的研究；在医学领域可用于蛋白标记、病原体示踪、建立肿瘤转移可视模型、研究牙胚的生长发育、观察神经元的形态特点和化学构筑、观察与特定功能有关的局部环路等等。
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