1.本人急需三篇高效液相色谱法的论文
本实验建立了一种灵敏、准确的高效液相色谱法,此方法可用于缬沙坦的血药浓度测定及人体药代动力学的研究。1材料与方法 1.1仪器与试药 Waters高效液相色谱仪,包括616泵,717自动进样器,447荧光检测器,Millennium2010色谱管理系。
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作者:卢来春,张蓉,刘同华,蒋学文 毕业论文 【摘要】 目的: 采用反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶。本文考察了异丙托溴铵含量的HPLC测定方法,为制剂的质量控制提供了方法学依据。1 仪器与材料 LC?10ATvp高。
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本文建立了反相高效液相色谱法测定呋苄西林钠的含量及有关物质,其专属性强,重现性好,操作简便。;;; 1; 仪器和试药 ;;; 1.1; 仪器 ;;; Agilent 1100高效液相色谱仪系列,包括四元泵、可变波长检测器、自动进样器和ChemStation。
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2.高效液相色谱法心得体会论文
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上,引用了气相色谱的理论,在技术上,流动相改为高压输送(最高输送压力可达4.9??107Pa);色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成,从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万);同时柱后连有高灵敏度的检测器,可对流出物进行连续检测。
特点 1.高压:液相色谱法以液体为流动相(称为载液),液体流经色谱柱,受到阻力较大,为了迅速地通过色谱柱,必须对载液施加高压。一般可达150~350*105Pa。
2. 高速:流动相在柱内的流速较经典色谱快得多,一般可达1~10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多,一般少于 1h 。
3. 高效:近来研究出许多新型固定相,使分离效率大大提高。 4.高灵敏度:高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器,进一步提高了分析的灵敏度。
如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外,用样量小,一般几个微升。
5.适应范围宽:气相色谱法与高效液相色谱法的比较:气相色谱法虽具有分离能力好,灵敏度高,分析速度快,操作方便等优点,但是受技术条件的限制,沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法,只要求试样能制成溶液,而不需要气化,因此不受试样挥发性的限制。
对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大(大于 400 以上)的有机物(这些物质几乎占有机物总数的 75% ~ 80% )原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。 据统计,在已知化合物中,能用气相色谱分析的约占20%,而能用液相色谱分析的约占70~80%。
高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。
其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好,且须在色谱仪中进行。 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 根据分离机制的不同,高效液相色谱法可分为下述几种主要类型: 1 .液 — 液分配色谱法(Liquid-liquid Partition Chromatography)及化学键合相色谱(Chemically Bonded Phase Chromatography) 流动相和固定相都是液体。
流动相与固定相之间应互不相溶(极性不同,避免固定液流失),有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱,溶质在两相间进行分配。
达到平衡时,服从于下式: 式中,cs—溶质在固定相中浓度;cm--溶质在流动相中的浓度; Vs—固定相的体积;Vm—流动相的体积。LLPC与GPC有相似之处,即分离的顺序取决于K,K大的组分保留值大;但也有不同之处,GPC中,流动相对K影响不大,LLPC流动相对K影响较大。
a. 正相液 — 液分配色谱法(Normal Phase liquid Chromatography): 流动相的极性小于固定液的极性。 b. 反相液 — 液分配色谱法(Reverse Phase liquid Chromatography): 流动相的极性大于固定液的极性。
c. 液 — 液分配色谱法的缺点:尽管流动相与固定相的极性要求完全不同,但固定液在流动相中仍有微量溶解;流动相通过色谱柱时的机械冲击力,会造成固定液流失。上世纪70年代末发展的化学键合固定相(见后),可克服上述缺点。
现在应用很广泛(70~80%)。 2 .液 — 固色谱法 流动相为液体,固定相为吸附剂(如硅胶、氧化铝等)。
这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是:当试样进入色谱柱时,溶质分子 (X) 和溶剂分子(S)对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附(未进样时,所有的吸附剂活性中心吸附的是S),可表示如下: Xm + nSa ====== Xa + nSm 式中:Xm--流动相中的溶质分子;Sa--固定相中的溶剂分子;Xa--固定相中的溶质分子;Sm--流动相中的溶剂分子。
当吸附竞争反应达平衡时: K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa] 式中:K为吸附平衡常数。[讨论:K越大,保留值越大。
] 3 .离子交换色谱法(Ion-exchange Chromatography) IEC是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换,依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。
以阴离子交换剂为例,其交换过程可表示如下: X-(溶剂中) + (树脂-R4N+Cl-)=== (树脂-R4N+ X-) + Cl- (溶剂中) 当交换达平衡时: KX=[-R4N+ X-][ Cl-]/[-R4N+Cl-][ X-] 分配系数为: DX=[-R4N+ X-]/[X-]= KX [-R4N+Cl-]/[Cl-] [讨论:DX与保留值的关系] 凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。 4 .离子对色谱法(Ion Pair Chromatography) 离子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与溶质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或反离子 ) 加到流动相或固定相中,使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物,从而控制溶质离子的保留行为。
其原理可用下式表示: X+水相 + Y-水相 === X+Y-有机相 式中:X+水相--流动相中待分离的有机离子(也可是阳离子);Y-水相--流动相中带相反电荷的离子对(如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等);X+Y---形成的。
3.论文:山葡萄酒高效液相色谱(HPLC)指纹图研究怎么做
目的采用高效液相色谱法建立注射用灰树花倍他葡聚糖的指纹图谱。
方法采用Shodex OH pak SB-804HQ色谱柱,以0.2mol/L磷酸二氢钠溶液为流动相,流速0.5mL/min,柱温35℃,以示差折光检测器(RID)进行检测,建立反映药材、中间体和注射剂多糖活性成分的指纹图谱(1);采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱,以乙腈为流动相A,水(含0.05%磷酸)为流动相B,进行梯度洗脱,流速1.0mL/min,柱温30℃,以二极管阵列检测器(DAD)在波长254nm处进行检测,建立反映药材其它成分指纹特性的指纹图谱(2)。结果10批灰树花发酵菌丝体药材、中间体和注射荆的相似度均在95%以上,多糖活性成分在药材、中间体和注射剂之间表现出良好的相关性,方法学考察结果也符合要求。
结论建立的指纹图谱既体现了多糖活性成分的相关性,又体现了药材其它组分的指纹特征,可用于灰树花药材鉴定和注射剂的质量控制。提供色谱柱。
4.液相色谱图有向下的曲线正常吗
明显有问题,任何一个分析测定方法首先要具有“选择性”,又称“专属性”,现方法不能与溶剂峰分离,选择性很差,肯定不正常。
另外,在溶剂峰前出现了一个杂质峰,说明你的运行时间太短了,前一个样品还没跑完就进了下一针样品,或方法本身有严重缺陷。作为分析方法探索性研究的预实验是可以的,如果用这样的方法得到的实验数据用在论文中肯定不合适,你的测定峰即没有回到色谱系统的基线,也没有选择性,测定结果一定不准确,结论是否可靠就说不准了。
这样图谱出现在你的论文,论文的质量一定很差。
5.如何写高效液相方案
【摘要】目的:RRLC(高分离度快速分离液相色谱)法测定AAA含量。方法:色谱柱:ZorbaxXDB_C18(4.6x50mm,1.8mm),柱温:AA℃;流动相:甲醇-乙酸水(AA:BB);检测波长:AAnm;进样量:AAμL,流速:AAml/min。结果:11在0.BB-0.BBmg/mL(R=0.9999)范围内峰面积与浓度呈良好线性关系,平均加样回收率为AA%,RSD=XX%(n=6)。结论:实验方法简单,快速,准确,可靠, 。。。。。。。。。。(需要写出做此实验的目的,如:为新药开发提供了基础研究数据等)
流动相配比 可以梯度洗脱
至于液相的使用条件 需要你自己摸索。
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