1.
真菌营养生长阶段的结构称为营养体。绝大多数真菌的营养体都是可分枝的丝状体,单根丝状体称为菌丝(hypha)。许多菌丝在一起统称菌丝体(mycelium)。菌丝体在基质上生长的形态称为菌落(colony)。菌丝在显微镜下观察时呈管状,具有细胞壁和细胞质,无色或有色。菌丝可无限生长,但直径是有限的,一般为2—30微米,最大的可达100微米。低等真菌的菌丝没有隔膜(septum)称为无隔菌丝,而高等真菌的菌丝有 各种真菌
许多隔膜,称为有隔菌丝。此外,少数真菌的营养体不是丝状体。而是无细胞壁且形状可变的原质团(plasmodium)或具细胞壁的、卵圆形的单细胞。寄生在植物上的真菌往往以菌丝体在寄主的细胞间或穿过细胞扩展蔓延。
2.有关菌种鉴定的论文
川乌植物内生真菌的分离和分类鉴定 【摘要】 目的从川乌植物的根和茎中分离内生真菌,并进行分类鉴定。
方法经显微形态观察进行内生真菌的分类鉴定。结果川乌植物根和茎中分离获得61株内生真菌,归属为2纲,5目,6科,17个属。
结论川乌植物不同部位内生真菌的数量、组成与种群分布存有差异; 从川乌植物中分离内生真菌尚属首次报道。 【关键词】 川乌; 内生真菌; 分离; 分类鉴定 Abstract:ObjectiveTo isolate and identify some endophytic fungi from the root and stem of Radix Aconiti. MethodsIdentification of endophytic fungi from Radix Aconiti was carried out by morphology. ResultsSixty-one strains of endophytic fungi were isolated from Radix Aconiti,which belonged to seventeen genera,six families and five orders. ConclusionThe diversities made obviously a great difference in quantity, composition and distribution of the endophytic fungi from Radix Aconiti. Key words:Radix Aconiti; Endophytic fungi; Isolation; Identification 川乌(Radix Aconiti),别名鹅儿花、铁花、五毒。
该植物性热,味辛、苦;具大毒。其主要成分为双酯型二萜类生物碱,如乌头碱(Aconitum)、中乌头碱(Misaconitine)、次乌头碱(Hypaconitine)等。
乌头碱具有强心、镇痛、抗肿瘤、调节免疫等的作用,临床上主要用于治疗恶性肿瘤、类风湿性关节炎、风湿性关节炎、痛风等慢性疾病。现代止痛新药多含有乌头类生物碱,对慢性疼痛的止痛效果并不低于西药,说明乌头类生物碱在缓解疼痛疾病方面已经引起临床医学的关注。
与此同时,药理学研究还表明乌头碱在抗肿瘤方面也具有良好的临床应用前景[1]。 目前,植物内生菌的研究国内外已经成为热点领域,以往对川乌植物的研究主要针对植物化学成分的报道为多,而对该植物内生真菌的发现、种类组成、数量与分布和种群多样性及其代谢活性物质的研究报道至今未见。
为此,我们对川乌植物内生真菌作了系统的研究,包括菌株分离、分类学地位、种群组成、数量与分布、代谢活性产物的分离等。本文就川乌植物内生真菌分离和分类鉴定的资源学方面研究报道如下。
1 材料 1.1 植物样品活体植物川乌(Radix Aconiti)采自云南省会泽县大海乡中草药种植基地,海拔高度3 150 m。 1.2 培养基分离培养基:PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基),临用时每毫升培养基中加80单位的青霉素以抑制细菌生长。
分类鉴定培养基:PDA培养基和促孢培养基(KH2PO4,MgSO4·7H2O,KNO3,KCl,葡萄糖,蔗糖)。 2 方法 2.1 内生真菌的分离首先用自来水冲洗净川乌植物的根、茎表面的泥沙,接着进行表面消毒[2],切成0.3 cm*0.3 cm大小的片段种植在PDA培养基里,置于(28±1)℃的温箱中静止培养。
培养3~12 d后,可见有菌丝生长,挑取植物组织周围的菌丝转接入PDA试管斜面,经纯化即得川乌植物内生真菌。 2.2 内生真菌的分类鉴定采用插片培养方法,对分离获得的内生真菌进行显微形态特征的观察、结合形态学分类方法,鉴定检索参照文献[3,4]。
3 结果 3.1 川乌植物内生真菌的种群组成从川乌植物中分离获得61株内生真菌,经显微形态观察,分属于2纲,5目,6科,17属(见表1)。 表1 川乌植物内生真菌种群组成(略) 从表1还可看出,在分离获得的61株内生真菌中,毛壳菌属Chaetomium最多,为12株,占菌株数的19.67%;束丝菌属Ozonium有6株,占9.84%;葡萄孢属Botrytis、匐柄霉属Stemphylium、交链孢霉属Alternaria和镰孢霉属Fusarium均为5株,占菌株数的8.20%。
这6属为川乌植物内生真菌的优势属,占总数的62.30%。槲果孢属Balanium、亚黑团孢属Periconiella和枝孢属Cladosporium均只有1株,只占1.64%。
3.2 川乌植物内生真菌在植株不同部位的分布在分离获得61株乌头植物内生真菌中,根部分离所得的内生真菌在数量和种属上都是最多的,有41株(占菌株数的67.21%)14个属(占17个属的82.35%);其余20株在茎部获得(占菌株数的32.79%),分属9个属(占52.94%)。见表2。
从表2可以看出,毛壳菌属为川乌植物根部的内生真菌的优势菌属,有11株,占根部的26.83%;川乌植物茎部的内生真菌的优势菌属为匐柄霉属(5株占茎部的25%);拟鞘孢属Chalaropsis、枝孢属Cladosporium、指轮枝孢属Stachylidium、茎点霉属Phoma、组丝核菌属Phacodium、丝葚霉属Papulospora和毛霉属Mucor共8个属只在根部分离得到;而匐柄霉属、槲果孢属Balanium和亚黑团孢属Periconiella仅在茎部有分布。 表2 川乌植物内生真菌的数量与种类分布(略) 4 讨论 鉴于川乌化学成分的特点与其它有毒植物不同,川乌植物内生真菌种群组成也表现出多样性特征。
由表1~2结果表明,根部种群与茎部种群不同,前者主要由毛壳菌属、葡萄孢属、拟鞘孢属Chalaropsis、束丝菌属、毛霉属等14个属种组成,后者则由匐柄霉属、交链孢霉属、镰孢霉属等9个属种构成,造成这样的现象可能与乌头碱成分的种类有关。 在数量上,川乌植物分离获得的内生真菌数量根部明显多于茎部组织,可见川乌植物内生真菌种群数。
3.求一篇微生物的纯系分离及保藏的实验报告
实验报告你自己写下吧,我好多年没写这个了。
下面是实验报告的材料,希望对你有帮助:-)!~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~分离~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 分离技术主要是稀释和选择培养。稀释是在液体中或在固体表面上高度稀释微生物群体,使单位体积或单位面积仅存留一个单细胞,并使此单细胞增殖为一个新的群体。
最常用的为平板划线法。如果所要分离的微生物在混杂的微生物群体中数量极少或者增殖过慢而难以稀释分离时,需要结合使用选择培养法,即选用仅适合于所要分离的微生物生长繁殖的特殊培养条件来培养混杂菌体,改变群体中各类微生物的比例,以达到分离的目的。
为保证分离到的微生物是纯培养,分离时必须用。~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~保种~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 定期移植法 将菌种接种于所要求的培养基上,在最适温度中培养,至静止期或产生成熟的孢子时,置入 5℃的冰箱(或冰库)保存。
在培养和保存的过程中,由于代谢产物的累积而改变了原菌的生活条件,结果菌落群体中的个体就不断衰老和死亡,因此每5~15天或 1~4个月重新移植一次,具体间隔时间因种而异。凡能人工培养的微生物都可用此法保存。
此法不需特殊设备,但烦琐,费时,而且经常移植容易引起菌种退化。矿油封藏法 将化学纯的液体石蜡(矿油)经高压蒸气灭菌,放在40℃恒温箱中蒸发其中的水分,然后注入斜面培养物中,使液面高出斜面约 1厘米。
将试管直立,放在15~20℃室温中保存。由于在斜面培养物上覆盖一层液体,既能隔绝空气,又能防止培养基因水分蒸发而干燥,可以延长菌种保藏的时间。
但注入的液体必须不与培养基混溶、对菌种无毒,不易被利用和挥发。此法适用于酵母菌、芽孢杆菌;不适用于固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、法门氏菌和毛霉目中的大多数属种。
此法简便易行,但必须注意防火和污染。沙土管法 将沙或土过筛、烘干、装管、灭菌、然后将菌种制成孢子悬液滴入其中混匀,放到盛氯化钙的干燥器里吸除水分,干燥后保存或用火焰封管后保存。
吸附在干燥沙土上的孢子因缺水而处于休眠状态,可保存较长时期。此法适用于芽孢杆菌、梭状芽孢杆菌、放线菌、镰刀菌等。
麸皮法 将麸皮制成培养基,培养要保存的菌种,待生长良好后,置干燥器中保存。这是根据中国酿造酒、醋、酱时制麴的经验所采用的一种保藏方法,适用于谷物微生物区系中的种类。
L-干燥法 又称液体干燥法或真空干燥法,用含3%谷氨酸钠的0.1M磷酸缓冲溶液 (pH7.0)做分散媒,将待保藏的微生物制成高浓度的细胞悬液,滴入无菌安瓿瓶中,每管0.05毫升;将安瓿瓶固定在多歧管上,并以水浴保持安瓿瓶内样品温度为10℃,在 13.3~1.3帕的真空度下干燥,火焰封管保存。此法不经冻结,用真实泵迅速抽乾,可避免菌种的冻伤或死亡。
广泛应用于病毒、噬菌体、细菌、酵母菌、蓝藻、原生动物等。梭氏法 将容有 1滴细胞悬液的小管,置于盛有氢氧化钾或五氧化二磷吸水剂的大试管中,用真空泵抽至1.3帕时,将大试管密封保存。
这是为减少细胞死亡率而采取的一种不经冻结、缓慢脱水的干燥保藏法,适用于多种细菌、真菌。冷冻真空干燥法 将细胞悬液每0.1~0.2毫升注入一无菌安瓿瓶,于-40℃预冻1小时,再于-20~30℃、真空度为13.3帕的条件下脱水。
在脱水过程后期,安瓿瓶外温度可逐渐升至25℃。脱水后的样品含水量应在 3%以下。
最后,将安瓿瓶保持真空度 1.3帕,用火焰溶封,置10℃保存。为防止细胞在冻结和脱水过程中损伤或死亡,要用保护剂制备细胞悬液。
保护剂有脱脂牛奶、血清、10%蔗糖或葡萄糖溶液等,其作用是通过氧和离子键对水和细胞所产生的亲合力来稳定细胞成分的构型。此法适用于病毒、衣原体、枝原体、细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌等的长期保存,是当前保藏菌种的一个重要方法。
但是,盐杆菌、发光杆菌、黏杆菌、阿舒囊霉、多囊霉、担子菌中的大多数属种不适用于此法保存。液态氮超低温冻结法 用甘油或二甲亚(DMSO)作保护剂制备细胞悬液,分装入无菌安瓿瓶,每管0.2毫升,在控制温度下降速率为1℃/分钟的条件下预冻至-40℃,然后立即放入液氮生物贮存罐中气相(-150℃)保存。
恢复培养时,先直接侵入38℃水浴中解冻 5~10分钟,再种植于适宜培养基内培养。这是根据在低于-130℃时一切生化反应处于停止状态、微生物也不能进行代谢活动而设计的冻结法。
为避免冻死、冻伤和细胞内形成大量冰晶,用保护剂制备悬液并控制预冻时的冷却速率和解冻时融化速率。微生物的大多数属种适于慢速冻结和快速解冻。
此法适用于病毒、枝原体、各种细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌、蓝藻等。
4.从自然界中分离纯化酵母菌的实验
1 食用菌母种的分离,可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等 2 孢子分离法,是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝,培养成菌种的方法。
这种菌种生活力较强,但孢子个体之间有差异,且自然分化现象较严重,变异大,需经出菇试验才能在生产上应用。 (l)单孢分离法:是每次或每支试管只取一个担孢子, 让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。
蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝,有结实能力,可采用此法分离生产纯菌种。单孢分离生产上较少采用,而且技术复杂,一般采用多孢分离法。
孢子分离法,是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝,培养成菌种的方法。这种菌种生活力较强,但孢子个体之间有差异,且自然分化现象较严重,变异大,需经出菇试验才能在生产上应用。
(l)单孢分离法:是每次或每支试管只取一个担孢子, 让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝,有结实能力,可采用此法分离生产纯菌种。
单孢分离生产上较少采用,而且技术复杂,一般采用多孢分离法。 (2)多孢分离法:就是把许多孢子接种在同一培养基上,让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。
具体操作方法,有以下几种: ①种菇孢子弹射法:选择个体健壮、朵形圆正,无病虫害、出菇均匀、高产稳产,适应性强的八九分成熟的种菇,切去大部分,菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内,把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面,漏斗倒盖在培养皿上面;上端小孔用棉花塞住。
培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上,静置12~20小时,菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。形成一层粉末状孢子印(平菇极淡紫色,蘑菇、草菇 为褐色,香菇、金针菇孢子印白色)。
用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。待孢子萌发,生成菌落时,选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。
还可用孢子采集器收集孢子。方法是选好种菇后,按上述程序,轻轻掀开玻璃钟罩,将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上,放在培养皿正中央。
随即盖好玻璃罩,用纱布将钟掌周围塞好。并在纱布上倒少许升汞或无菌水。
移入 20℃左右恒温箱培养。
5.单菌种的分离是消除污染杂菌的一种方法吗
在自然界里,食用菌都不是单独存在的,而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的.所谓菌种分离,就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来,通过培养,获得纯的优良菌种.菌种分母种、原种、栽培种. (一)母种的分离培养 食用菌母种的分离,可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等. 1.孢子分离法 孢子分离法,是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝,培养成菌种的方法.这种菌种生活力较强,但孢子个体之间有差异,且自然分化现象较严重,变异大,需经出菇试验才能在生产上应用. (l)单孢分离法:是每次或每支试管只取一个担孢子, 让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法.蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝,有结实能力,可采用此法分离生产纯菌种.单孢分离生产上较少采用,而且技术复杂,一般采用多孢分离法. (2)多孢分离法:就是把许多孢子接种在同一培养基上,让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法.具体操作方法,有以下几种: ①种菇孢子弹射法:选择个体健壮、朵形圆正,无病虫害、出菇均匀、高产稳产,适应性强的八九分成熟的种菇,切去大部分,菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分.在接种箱或无菌室内,把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面,漏斗倒盖在培养皿上面;上端小孔用棉花塞住.培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上,静置12~20小时,菌褶上的孢子就会散落在培养皿内.形成一层粉末状孢子印(平菇极淡紫色,蘑菇、草菇 为褐色,香菇、金针菇孢子印白色).用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种.待孢子萌发,生成菌落时,选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养. 还可用孢子采集器收集孢子.方法是选好种菇后,按上述程序,轻轻掀开玻璃钟罩,将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上,放在培养皿正中央.随即盖好玻璃罩,用纱布将钟掌周围塞好.并在纱布上倒少许升汞或无菌水.移入 20℃左右恒温箱培养. ②褶上涂抹法:按无菌操作分离时;应选择成熟的种菇,用接种针直接插入褶片之间,轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子,再在培养基上划线接种. ③钩悬法:取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片(黑木耳、毛木耳、白木耳〕,用无菌不锈钢丝(或铁丝、棉线等其他悬挂材料)悬挂于三角瓶内的培养基的上方,勿使接触到培养基或四周瓶壁.置适宜温度下培养、转接即可. ④贴附法:按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块, 用溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等贴附在配管斜面培养基正上方的试管壁上.经6~12小时的培养,待孢子落在斜面上,立即把孢子连同部分琼脂培养基移植到新的试管中培养即可. 孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮,当母种定植一星期左右,菌丝布满斜面时,选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂茵的母种试管,进而转管扩大,一般到栽培种,转管不宜超过5次. 孢子分离得到的母种,必须通过出菇试验,鉴定为优质菌种后,才可供生产使用. 一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、冬菇和草菇等,都可用多孢分离法获得母种. 现就银耳孢子分离略述于下: 按无菌操作获取种耳后,悬挂种耳的三角瓶经12小时培养后,瓶底培养基表面就有"孢子印".取出种耳,置 20℃—25℃温箱培养2~3天,培养基表面会出现乳白色透明的糊状小菌落,就是银耳的酵母状分生孢子形成的少量银耳菌丝.此时移接入试管斜面培养基上,待长满斜面后,再移接入营养丰富,且表面比较干燥的培养基上.经30天左右,菌落长出白色菌丝. 银耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝的子囊菌(香灰菌丝)混合培养时,由后者帮助分解木材及其他一些纤维物质,提供营养,才能利于银耳孢子萌发,菌丝的定植和子实体的形成. 在两种菌丝交会时,先选出两种纯菌丝. 羽毛状菌丝要纯化选育,一般要选取生长迅速,爬壁力强的试管斜面或种瓶,取先端菌丝,转管移接,置25℃—28℃上培养,重复转管几次即可得到优良纯种. 银耳菌丝的特点,菌丝生长缓慢,担孢子也不易萌发.在进行两菌混合时,先取经8~IO天培养的银耳菌丝斜面,按无菌操作方法在该斜面上距银耳菌丝约0.5厘米处接入一 小块羽毛状菌丝.置25℃下培养1周即得到混合好的银耳母种. 2.组织分离培养法 利用子实体内部组织,进行无性繁殖而获得母种的简便方法,即组织分离.该法操作简便,菌丝生长发育快,品种特性易保存下来,特别是杂交育种后,优良菌株用组织分离法能使遗传特性稳定下来.常采用以下分离方法. (l)子实体分离:种菇要选朵大盖厚,柄短,八九分成熟的优良品种.切去菇两基部,在无菌箱内以0.1%的升汞水浸几分钟,再用无菌水冲洗并揩干或用75%酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次,进行表面消毒.接种时,只要将种菇撕开,在萌盖和菌柄交界处或菌褶处,挑取一小块组织;移接 到PDA培养基上.置25℃左右温度下培养3-5天,就可以看到组织上产生白色绒毛状菌丝,转管扩大即得到菌种.如香菇、平菇等可以用此方法. (2)菌核分离:茯苓、猪苓、雷丸等菌的子实体不易采集.而常见的是它贮藏营养的菌核.用菌核分离,同样可以获得。
6.求篇关于放线菌分离的中英文对照全文文献
放线菌作为生物活性物质的主要产生菌早已成为人们研究的焦点。
然而随着放线菌分离和分类研究的不断深入,大量常见菌株已被反复研究,因此从中发现新化合物的几率逐渐降低。由于新物种具有产生新的生物活性物质的潜力,人们开始使用新的方法在尽可能广泛的范围内寻找新的物种,特别是那些用常规方法很少分离到的稀有放线菌 (rare actinornycetes)…。
2O世纪 50年代以来人们从稀有放线菌中发现了大量有价值的抗生素,如小单孢菌产生的庆大霉素,诺卡氏菌产生的利福霉素,马杜拉放线菌产生的马杜拉霉素和洋红霉素,糖多孢菌产生的红霉素,游动放线菌产生的游壁菌素,拟无枝酸菌产生的万古霉素等等。这些事实表明稀有放线菌也具有产生新抗生素的巨大潜力ll,21。
分离这些稀有放线菌,不仅可以减少对产生已知生物活性物质菌株的重复分离,还可扩展放线菌次生代谢产物的化学多样性。 由于稀有放线菌对生长环境的特殊要求,难以用常规手段分离获得 ,所以要根椐不同类群的特性设计针对这些特定种属的选择性分离方法。
近年来,国内外学者在对国家自然科学基金资助项目,云南省自然科学基金重点项目.稀有放线菌选择性分离的研究方面取得了较大进展,同时也用这些选择性分离方法分离到不少稀有放线菌,并显著提高了具有医用前景的生物活性物质的发现机率。此外,这些分离方法的使用也有助于同答这样一个问题 :稀有放线菌很少被分离到是因为它们在环境中数量稀少,还是仅仅因为它们难以被分离和培养。
本文就以上情况介绍了近年来发展起来的几种高选择性分离稀有放线菌的有效方法。 1 胞外多糖胶 (gellan gum)和动孢溶液 (flooding solution)相结合的分离方法 Gellan gum是由Pseudomonas elodea产生的胞外多糖,过去常用来作为植物组织培养的凝固剂,能促进植物生长。
Suzuki等人 首先将其用于稀有放线菌的分离,并发现胞外多糖胶能促进很多放线菌的气生菌丝生长和孢子形成.很多物质都能增加放线菌游动孢子的游动性,如蛋[j胨,牛肉膏,含土壤浸汁的磷酸盐缓冲液,脱脂牛奶等。各种动孢溶液对不同的菌影响不同,Suzuki等在使用脱脂牛奶作为动孢溶液时发现不同的菌对脱脂牛奶的浓度、pH、处理时的温度、离心时的速度及时间有不同的要求。
另外,使用高压灭菌后的脱脂牛奶比使用未灭菌的脱脂牛奶所获得的游动孢子数少,这可能因刺激孢子游动性的物质对高温高压敏感所致l4]。 1.1 选择性分离鱼孢菌 Suzuki等曾以鱼孢菌作为他们筛选生物活性物质的目标菌,对采自28个国家的466份土样进行了分离,从 2l份土样中分离到了鱼孢菌,发现鱼孢菌广泛分布于亚洲,欧洲,大洋洲,南美洲和北美洲。
他们所使用的高选择性分离方法是l4j:200mg土样自然风干一80℃干热处理60min冷却,加 2mL 0.1%脱脂牛奶 (溶于 lOmmol/[ MOPS,pH 8.0)-+27cC温育 60rain,不时摇动以释放游动孢子一1,000*g室温离心 l0min一取上清液梯度稀释后涂布 HVG平板 (0.05%腐殖酸,2mmol/L CaCI ,0.7%胞外多糖胶),27℃培养 21~28d。HVG培养基是在 HVA培养基的基础上改进的,与 HVA不同的是HVG含有 CaC1,并以胞外多糖胶代替琼脂。
加入适量的 CaC1 不仅使胞外多糖胶得以凝固,而且比加入 MgSO 和 MgCI 更有利于某些放线菌的气生菌丝生长和孢子形成 。1.2 选择性分离游动单孢菌 玫瑰色游动单孢菌能产生孢囊霉素,这种含硫的抗生素能通过抑制芽孢杆菌等革兰氏阳性菌的蛋白合成而影响其生K。
对游动单孢菌的高选择性分离程序是_6j:500mg土样 自然风下一l00℃干热处理60min 冷却,加入 2mL灭菌的 0.1%脱脂牛奶 (溶于 5mmol/L CHES,pH 9.0) 32℃温育90rain,不时摇动以释放游动孢子一1,000*g,室温离心 l0min一再于32 温育60rain一取上清液梯度稀释后涂布于 HSG平板 (含三甲氧苄二氨嘧啶 20mg/L,萘啶酸 lOmg/L,依诺沙星 20rng/L,氨苄青霉素钠 2mg/L,放线酬 50mg/L,制霉菌素50 mg/L),35℃培养 l4~21d。用这种方法对 1,200份土样进行分离时,从 137份土样中分离到246株游动单孢菌。
并发现委内瑞拉游动单孢菌广泛存在于从热带到温带的土壤中,但在土壤中的密度很低。HSG培养基 组成:0.05% 腐质 酸,3mmol/L CaC12,0.000l% FeSO4•7H2 O,0.0001% MnC12'4H2O,0.0001% ZnSO4•7H2O,0.0001% NiSO4•6H2O,5mmol/L CHES,0.7%胞外多糖胶 ,pH9.0。
1.3 选择性分离游动双孢菌 对游动双孢菌 (Planobispora)的高选择性分离程序是 :500mg土样 自然风干---~90%干热处理 60min一冷却,加人 2mL 0.1%脱脂牛奶 ,0.01%Tween80,lOOmg/L三甲氧苄二氨嘧啶,lOOmg/L萘啶酸 (溶于5mmol/I CHES,pH 9.0)---~35。【=温育60min,不时摇动以释放游动孢子一1,000*g,室温离心 l0min一 取上清液梯度稀释后涂布 HSG平板 (含三甲氧苄二氨嘧啶 50mg/L,萘啶酸 50mg/L,依诺沙星20mg/L,氨苄青霉素钠 2m L,链霉素 lm L,放线酮 50mg/L,制霉菌素 50 me,/I ,pH9.0),32oC培养 l4~21d。
利用这种方法,对采 自世界各地的 1,467份土样进行的分离中,从5l份土样中分离到 l】9株游动双孢菌,88%。
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