1.求一篇血液中提取DNA的文章
我的论文也是做牛的,比你麻烦多了,有DNA的提取,PCR,PCR-SSCP,测序。
下面是我的操作方法:
第一,冷冻血样于室温解冻。打开水浴锅调温度37℃,打开高速离心机调至4℃,打开制冰机制冰。
第二,取500µl血样加入到1.5毫升离心管中,加入等体积PBS液(500µl),置于有盖的装有冰块的冰盒中,翻转冰盒以充分混匀, 4℃、12000rpm、离心10min。
第三,弃上清,(打散下面的沉淀小块)重复上述步骤中加PBS、离心等,至上清液透明,沉淀呈淡黄色。(一般重复4~5次)
第四,加入DNA抽提液500µl,摇匀,使血细胞沉淀与离心管壁分离,37℃水浴1小时。
第五,加蛋白酶K5µl(20mg/ml)混匀,55℃过夜至澄清(对未澄清者可补加10µl蛋白酶K混匀,继续消化至澄清)。
第六,反应液冷却至室温,加Tris-饱和酚500µl,在有盖的装有冰块的盒中摇匀,混合摇动离心管20 min,使其充分混匀;4℃、12000rpm、离心10min,将上清液用剪去尖头的枪头转入另一个1.5ml的离心管中,重复一次(加Tris-饱和酚500µl,离心)。
第七,加氯仿500µl,充分混匀20min, 4℃、12000rpm离心10min,将上清液再次转移至另一个1.5ml的离心管中。
第八,加氯仿-异戊醇混合液(24:1)500µl混匀20min(以减少反应产生的泡沫),4℃、12000rpm、离心10min,将上清液转入1.5ml离心管。
第九,加入0.2倍体积的NH4Ac缓冲液,再加入2倍体积的冰冷无水乙醇,口底上下翻转离心管混合,至白色絮状沉淀析出,-20℃保存30-60min。
第十,离心:4℃、12000rpm、10min,弃上清,用70%的冷乙醇漂洗DNA沉淀2次。(加500微升乙醇摇匀后离心,重复上述步骤一次)
第十一,离心:4℃、12000rpm、10min,弃上清,室温下使乙醇挥发干净。
第十二,DNA溶解。干燥后DNA溶于50µl的TE液,4℃保存,直至DNA完全溶解。
0.8%琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA具体步骤如下:
第一,缓冲液配制:用10*TBE缓冲液贮液稀释为0.5*TBE:取10ml10*tbe缓冲贮存液,加蒸馏水稀释至200ml,摇匀待用;凝胶加样缓冲液含40%(w/v)蔗糖水溶液,0.25%溴酚蓝(4℃保存)。
第二,清洗:将胶床和梳子彻底洗净,晾干,在胶床两端用透明胶布封住,形成挡槽,压紧贴严胶布,确保灌胶时不漏,将梳子插入,将胶床放在工作台的水平位置。
第三,制胶:取12ml的电泳缓冲液倒入锥形瓶中,加入准确称量的0.096g琼脂糖,在微波炉中将悬浮液加热溶解,沸腾除去气泡,将溶液冷却至60℃左右,加入0.6μl的GoldViewTM 染料原液,摇匀后,倒入胶床中,放置30min,使其完全凝固。
第四,分别取1μl的上样缓冲液点在干净的塑料手套上,再加入5.0μl DNA样品溶液并用移液枪吸打混合。
第五,加样:待琼脂糖凝胶完全凝固后,揭掉胶布,拔出梳子,在每个加样槽中用移液枪缓慢加入待检的DNA样品。
第六,加电泳缓冲液:将胶床放入电泳槽,倒入约100ml电泳缓冲液,没过胶面约1mm,并使加样槽内充满缓冲液。
第七,电泳:上样完毕,接通电源,靠近加样槽的一端接负极,80V电压5 min,然后40V稳压电泳30~40min。
第八,照相:待溴酚蓝迁移至胶的2/3处时,切断电源,将凝胶移至BioSpectrum Imaging System中,312nm波长下拍照。
2.关于DNA的论文怎么写
DNA指纹技术对近交系小鼠生产扩大群的遗传检测
近交系小鼠具有遗传的稳定性和表型的一致性,越来越多地应用于科学研究中。但由于在近交系小鼠的繁育过程中容易发生遗传污染或突变,应用这样的动物进行试验,不仅会造成经济浪费,而且可能得出错误的结论,因此加强对近交系小鼠遗传质量的检测非常必要。长期以来,应用于近交系小鼠遗传质量检测的方法主要有:皮肤移植法、毛色基因检测及生化位点检测技术等。随着分子生物学技术的发展,DNA指纹技术已初步被应用于近交系小鼠的遗传质量检测。本文通过DNA指纹技术在近交系小鼠生产扩大群遗传检测中的应用研究,并与生化位点标记分析法进行比较,旨在筛选出具有精确、可靠、特异性好的实验动物遗传检测方法,为建立分子生物学实验动物遗传质量监测技术和标准奠定基础。实验采用生物素标记的(GGAT)4寡核苷酸探针对C57BL/6J、BALB/c和DBA/2三个近交系扩大群种鼠进行了DNA指纹分析,发现在2.2Kb-9.4Kb之间均出现了10条以上清晰可见、易于判别的图谱条带。同一品系近交系小鼠DNA指纹图带相一致,其相似系数为0.95-1.0;而不同品系近交系小鼠的DNA指纹图带差异很大,其相似系数仅为0.21-0.35。结果证明生物素标记的(GGAT)4寡核苷酸探针具有高度多态性,用其标记的DNA指纹技术能够对近交系小鼠进行遗传监测。近交系小鼠生产扩大群只能繁殖四代,第五代可能出现遗传污染。,,,,,,,。。。。。。。
详细论文请上:
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3.有基因和疾病关系抽取方面的论文吗
最新研究结果表明,人类绝大多数疾病都与基因有关。
人类掌握自身健康命运的梦想正在随着基因功能研究的深入接近现实。科学表明人与人之间基因99.9%相同,差别非常小。
但正是那剩余的0.1%的差异,造成了人与人之间健康状况的差异。现代分子生物医学证明,某种基因型的人群更容易出现某种类型的健康问题,这些异常可能来自遗传,也有可能在生活中受有害环境因素诱发。
同样是对未来可能发生的事件的预测与判断,基因检测是长期艰苦科学探索的成果,经得起时间的考验和千百次重复实验的验证。现代生物医学研究已经证明,人类的健康状况及疾病的发生与基因、环境因素有着密切的关系,疾病的发生是基因与环境因素共同作用的结果。
因此,基因检测可以了解自身的基因缺陷,避免不利环境因素的影响,以便更科学的去管理和规划自己的健康。
4.关于基因工程的论文
晕,怎么都是关于这样的文章,我都回答4道了。
内容:基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用,包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建(即重组DNA技术);而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。 基因工程是利用重组技术,在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法,对各种生物的核酸(基因)进行改造和重新组合,然后导入微生物或真核细胞内进行无性繁殖,使重组基因在细胞内表达,产生出人类需要的基因产物,或者改造、创造新的生物类型。 从实质上讲,基因工程的定义强调了外源DNA分子的新组合被引入到一种新的寄主生物中进行繁殖。这种DNA分子的新组合是按工程学的方法进行设计和操作的,这就赋予基因工程跨越天然物种屏障的能力,克服了固有的生物种间限制,扩大和带来了定向创造生物的可能性,这是基因工程的最大特点。 基因工程包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接,构成新的重组的DNA,然后送到受体生物中去表达,从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。 基因工程要素:包括外源DNA,载体分子,工具酶和受体细胞等。 一个完整的、用于生产目的的基因工程技术程序包括的基本内容有:(1)外源目标基因的分离、克隆以及目标基因的结构与功能研究。这一部分的工作是整个基因工程的基础,因此又称为基因工程的上游部分;(2)适合转移、表达载体的构建或目标基因的表达调控结构重组;(3)外源基因的导入;(4)外源基因在宿主基因组上的整合、表达及检测与转基因生物的筛选;(5)外源基因表达产物的生理功能的核实;(6)转基因新品系的选育和建立,以及转基因新品系的效益分析;(7)生态与进化安全保障机制的建立;(8)消费安全评价。
目的基因导入受体细胞后,是否可以稳定维持和表达其遗传特性,只有通过检测与鉴定才能知道。这是基因工程的第四步工作。 以上步骤完成后,在全部的受体细胞中,真正能够摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。因此,必须通过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检测。检测的方法有很多种,例如,大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因,当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒,并被转入受体细胞后,就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因。重组DNA分子进入受体细胞后,受体细胞必须表现出特定的性状,才能说明目的基因完成了表达过程。
忘了问一下,是多少字的论文。(希望能采纳,一个字一个字打进去的,没有功劳也有苦劳)
5.我想提取酵母菌总DNA请问目前用什么方法比较好
DNA提取基本需要经历研磨(破坏细胞壁),组织匀浆,离心(将细胞壁,蛋白质等杂志沉淀)、洗涤(乙醇)、沉淀(去除杂志)、再次洗涤沉淀,重悬,几个步骤,但是针对不同细胞以及DNA提取后的不同用处,提取方法有很多,建议你到中国知网上搜索硕士、博士的学位论文,其中会有目前科研上较为常用的方法,帅选与你需求匹配的方法。之所以建议你去找硕士博士论文是因为硕士博士毕业论文里面会有详尽的叙述,如果只是找到发表到杂志期刊上的科技论文,对这部分基础操作的叙述可能不很详细。
希望能够帮助到你
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