1.色谱的操作步骤
一、开机 1、开机前准备:流动相使用前必须过0.45um的滤膜(有机相的流动相必须为色谱纯;水相必须用新鲜注射用水,不能使用超过3天的注射用水,以防止长菌或长藻类); 把流动相放入溶剂瓶中。
A瓶:为水相 B瓶:为有机相。 2、打开电脑,选Win 2000,进入Win 2000界面。
3、双击CAG Boodp server图标,放大CAG Boodp server小图标,出现窗口,5min内打开液相各部件电源开关,等待1100广播信息后,表示通讯成功连接,关闭CAG Boodp serve窗口。 4、双击online图标,仪器自检,进入工作站。
该页面主要由以下几部分组成: ——最上方为命令栏,依次为File,Run Control,Instrumen…等; ——命令栏下方为快捷操作图标,如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等; ——中部为工作站各部件的工作流程示意图;依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告; ——中下部为动态监测信号; ——右下部为色谱工作参数:进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。 4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
二、编辑参数及方法 1、开始编辑完整方法: 从“Method”菜单中选择“New method”,出现DEF-LC.M,从“Method”菜单中选择“Edit entire method”,选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项,单击OK,进入下一画面。 2、方法信息: 在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等。
单击OK,进入下一画面。 3、泵参数设定: 进入“Setup pump”画面,在“Flow” 处输入流量,如1ml/min;在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0,(A=100-B),也可在Insert 一行“Timetable”,编辑梯度;输入保留时间;在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
单击OK,进入下一画面。 4、DAD检测器参数设定: 进入“DAD signals”画面,输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽(参比波长带宽默认值为100nm); 选择Stoptime:as Pupm; 在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”:选All;如只进行正常检测,则可选None; 范围Range:可选范围为190~950nm; 步长Step可选2.0nm; 阀值: 选择需要的灯; Peak width(Response time)即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽,可选“2s”或4s; Slit-:狭窄缝,光谱分辨率高;宽时,噪音低。
可选4nm 单击OK,进入下一画面。 5、进入“Signal Details”画面,单击OK,进入下一画面。
6、进入“Edit Integration Events”(编辑积分结果)画面,单击OK,进入下一画面。 7、进入“Specify report”(积分参数)画面,单击OK,进入下一画面。
8、进入“Instrument curves”画面,单击OK,进入下一画面。 9、进入“Run Time checklist”(运行时间表)画面,选择“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”,单击OK,完成参数设定,回到工作站画面。
10、单击“Method”菜单,选中“Save method as”,输入文件名,单击OK。(路径:e\HPCHEM\1\methods\***) 注:如果调用一个方法,则在“Method”菜单,选中“Load method”,选方法名,单击OK。
11、从菜单“View”中选择“Online signal”,选中Window 1 ,然后单击Change钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点OK。(如同时检测二个信号,则重复11,选中Window 2)。
三、运行样品 1、单击泵(Pump)图标下面的小瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,并且选停泵体积。单击OK。
2、手动打开Purge阀:逆时针转2~3圈。 3、单击泵(Pump)图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。
设Flow:5ml/min,单击OK。 4、开泵:直接点Pump图标下面的泵开关小图标,或单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump contrlo选项,选中On,单击OK。
5、系统开始排液(Purge),直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续排液,直到所有通道无气泡为止。(每个管线内液体约20ml,在5ml/min的流速下,均需4~5min才能排完) 6、单击泵(Pump)图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。
把Flow改为0.5~1.0ml/min,单击OK。 7、等待流速降下来后,关闭排液阀。
8、待压力稳定后,从“Instrument”菜单中选择“System on”或单击GUI图标的On图标启动系统。开始走基线,并可选择观察信号。
注:仪器运行过程,画面颜色由灰色转变成黄色或绿色,当各部件都达到所设参数时,画面均变为绿色,左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”,表明可以进行分析。(此时如果要终止仪器的运行,可单击流程图右下角的“off”,再单击“Yes”,关闭输液泵和检测器氘灯)。
9、单击最大化按钮,将online Plot窗口放大。待基线平稳后,点信号窗口的“Banlance”,调至零点。
10、等仪器Ready ,从“Runcontrol”菜单中选择F5或“Run method”。 11、编辑样品信息: 从“Run control”菜单中选择“Sample into”选项,选择“Sample Info…..”,即打开了样品信息页面,输入操作者(Operator。
2.HPLC图谱怎么处理
njutcmxlz(站内联系TA)在液相里头尽量修好了拷贝出来,液相里头有图谱编辑的,出来若再要修改在画图板修修就可以了。
cjl2fl(站内联系TA)液相的图谱导出来,就可以适当修改下背景,可以用PS,或者用直接复制到WORD里也可以编辑 修改haozilai99(站内联系TA)机器一体化。自带的吧。
凉菜(站内联系TA)先将结果转成PDF格式,然后再将图倒出来就会好看多了,不用PS处理了。hnjdd(站内联系TA)是不是你的方法有问题,优化一下试试看arkingdom(站内联系TA)学习一下哈shmilyrong(站内联系TA)也来学习一下痴夷子皮(站内联系TA)液相工作站自带处理。
看看说明书吧。
yurong1000(站内联系TA)有的谱图当然是本身就好,但有的是把标尺调高了,这样基线什么的就看着很平,峰形本来有拖尾的也看不出来了kikache(站内联系TA)HPLC 自带分析软件吧。
软件叫chemstation。做出来的图谱都很好的。
3.怎么对色谱图进行样品分析含量
对于色谱图的计算: 1、利用对照品或者标准品图谱的保留时间tR,其峰面积为Ar,以及对照品或标准品的浓度Cr,由保留时间,对照样品图谱,确定所测成分峰的位置,对应找出其样品中所测成分的峰面积Ax,以及换算出取样量去浓度的关系. 2、要确定含量测定用的是什么方法,比如常用的有气相色谱的内标法、外标法,HPLC的外标一点法、外标两点法、标准曲线法等. 3、对上述数据,一般都要做平行试验,求出其峰面积为Ar的平均值,测成分的峰面积Ax的平均值.因为待测成分的浓度或者质量与峰面积成正比。
4.液相色谱分析的图谱怎么样修改
修改操作方法如下:
1、将电脑系统时间调整至目的进样时间;
2、用N2000离线工作站打开需要修改的图谱;
3、如有需要,在此步骤可以对图谱信息(如实验人,单位、标题等等)进行修改;
4、保存文件,选择保存格式***.dat;
5、用N2000离线工作站打开刚保存的***.dat,再次保存,选择保存格式***.mdy;
6、将***.mdy文件后缀直接改成***.org,完成。
如此产生的每一个图谱都有***.dat和***.org两个文件,符合系统采集时生成的图谱要求。
高效液相色谱以经典的液相色谱为基础,是以高压下的液体为流动相的色谱过程。通常所说的柱层析、薄层层析或纸层析就是经典的液相色谱。所用的固定相为大于100um 的吸附剂( 硅胶、氧化铝等)。这种传统的液相色谱所用的固定相粒度大,传质扩散慢,因而柱效低,分离能力差,只能进行简单混合物的分离。而高效液相所用的固定相粒度小(5um-10um)、传质快、柱效高。高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法。近年来,在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。世界上约有80%的有机化合物可以用HPLC来分析测定。
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