fitcdextran毕业论文

1.我想做β

目的：测定肿瘤组织异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（FITC?dextran）粘附水平是否可作为肿瘤血管密度的量化指标。

方法：用endolgin疫苗免疫小鼠后，在同一只小鼠上同时建立小鼠Meth A纤维肉瘤模型和藻酸盐包被肿瘤细胞试验模型，2周后将FITC?dextran注射入小鼠体内，然后手术完整摘取肿瘤组织和藻酸盐颗粒，取部分肿瘤组织进行免疫组化检测血管密度的同时，将其他组织和藻酸盐颗粒匀桨并离心，取上清检测荧光强度，分析二者之间是否存在直线相关关系。结果：免疫组化和肉眼观察显示2种测定方法均有明显的血管生成效应，用FITC?dextran粘附测定肿瘤组织血管相对密度和藻酸盐包被试验均能较好地量化测定抗血管生成效果，直线相关分析表示二者的疫苗免疫实验组FITC?dextran的测定值之间呈明显的正性相关关系（r = 0.962,P【关键词】 肿瘤；血管；动物模型；藻酸盐包被肿瘤细胞试验 Quantitative determination of relative tumor vascularity by FITC?dextran adsorption TAN Guang?hong, HUANG Feng?ying, WANG Hua, et al. ( Hainan Provincial Key Laboratory of Tropical Medicine, Haian Medical College, Hainan, Haikou 571101, P.R. of China) 〔ABSTRACT〕 Objective: To evaluate whether determination of FITC-dextran adsorption in tumor tissues is suitable for quantitative evaluation of tumor angiogenesis. Methods: After induction of antiangiogenic immunity in mice using xenogenic endogin protein, Meth A fibrosarcoma tumor cells were incubated in the conventional method of setting tumor model. Alginate?encapsulate tumor cell assay was performed on the same mouse at the same time, and no immune mice were used as control as well. 14 days later, alginate beads and the whole tumor tissue were removed surgically and quantified the uptake of FITC?dextran, and partial tumor tissues were used for immunohistochemistry determination of the vessel density, using antibody reactive to CD31. In addition, linear correlation analysis was used to evaluate the relationship. Results: The antiangiogenic effects were significantly induced in the two models respectively, and linear correlation analysis of the uptake of FITC?dextran showed significant positive correlations between the two vaccine?immunized treated groups in the two models (r=0.962, P 〔KEY WORDS〕 Tumor; Blood vessel, Animal model, Alginate?encapsulate tumor cell assay 肿瘤的发生、发展和转移与血管生成（angiogenesis）密切相关。

我们在研究实验中发现〔1,2〕，如果抗肿瘤血管生成的治疗方案确实有效，除了表现为肿瘤体积较小，生存时间延长外，在肿瘤的组织切片中也表现为血管密度明显减少。藻酸盐包被肿瘤细胞模型是目前定量测定肿瘤血管生成的标准方法〔3〕，它的主要原理是将异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖（FITC?dextran）注射进入体内后，葡聚糖就会粘附于内皮细胞表面、部分可能被内皮细胞吸收而滞留于血管腔中。

通过测定藻酸盐颗粒中的葡聚糖的荧光强度并和标准曲线相比较，就可得到量化的结果。因此我们设想，如果肿瘤组织中血管密度相对较少，肿瘤组织的血管粘附、吸收和滞留葡聚糖的数量也应该相应减少，通过比较不同肿瘤组织吸收FITC?dextran相对荧光强度，就能够量化了解不同肿瘤组织的血管密度。

本研究将FITC?dextran注射于活体荷瘤小鼠中，然后测定肿瘤组织FITC?dextran水平并和藻酸盐包被模型相比较，了解二者之间是否存在相关关系。 1 材料与方法 1.1 实验材料 FITC?dextran购自Sigma Chemical公司，藻酸钠（Alginic Acid,Sodium Salt）购自Sigma Chemical 公司，苯巴比妥钠购自上海新亚药业有限公司，RPMI?1640培养基和胎牛血清（FCS）购自美国GibicoBRL公司。

重组猪endoglin蛋白为作者构建表达并纯化〔1〕。6~8周龄雌性BALB/c小鼠购自四川大学动物中心，小鼠Meth A 纤维肉癌（Meth A）细胞株由生物治疗国家重点实验室（四川大学）赠送。

大鼠抗小鼠CD31(PECAM?1)单克隆抗体购自BD Pharmingen公司，VECTASTAIN Elite ABC Kit 购自Vector Laboratories公司。荧光酶标仪Microplate Fluorescence Reader,FL600，为Bio?Tek公司产品。

1.2 实验方法 1.2.1 免疫方法 将重组endoglin蛋白冻干粉剂于无菌条件下称量，溶于无菌的生理盐水（NS）中，与灭菌的氢氧化铝凝胶佐剂〔A〕（OH）3按4∶1(V/V)混匀（氢氧化铝终浓度约为2 mg/mL），室温下放置30~60 min。然后将实验小鼠随机分两组，每组各10只。

实验组小鼠每只背部皮下注射上述混合好的endgolin蛋白疫苗每次10 μg(100 μL)。对照组每只小鼠注射NS：佐剂为4∶1的混合液100 μL。

每组注射均为1周1次，共4次。 1.2.2 细胞培养 从液氮中取出冻存保种的Meth A细胞，迅速置于37 ℃水浴复温融化，在超净工作台内用培养基洗涤1次。

然后用完全培养基于37 ℃，5% CO2培养箱中培养。收集对数生长期细胞，1 500 rpm离心3 min，细胞沉淀用无抗生素无血清的培养基洗涤1次，计数细胞数量后。

2.陈龙的已发表的部分研究论文

1. “Bacteria-mediated synthesis of metal carbonate minerals with unusual morphologies and structures”, Crystal Growth & Design, 2009, 9(2): 743-754. (IF = 4.2, JCR 2 区)2. “Seed-mediated synthesis of unusual struvite hierarchical superstructures using bacteria”, Crystal Growth & Design, 2010, 10(5): 2073-2082. (IF = 4.2, JCR 2 区)3. “The Role of Escherichia coliform in the Biomineralization of Calcium Oxalate Crystals”, European Journal of Inorganic Chemistry, 2007, 3201-3207. (IF = 2.9, JCR 3 区)4. “Biomimetic synthesis of aragonite superstructures using ”, Journal of Solid State Chemistry, 2011, 184 (11): 2825-2833. (IF = 2.4, JCR 3 区)5. “Biological synthesis of calcite crystals using Scindapsus aureum petioles”, Journal of Materials Science, 2010, 45: 2938–2943. (IF = 1.8, JCR 3 区)6. 两种细菌体系中碳酸钙的仿生合成， 中国化学会第七届全国无机化学学术会议论文集（下册），853.（会议论文）7. 变形杆菌体系中球霰石空心球的仿生合成， 中国化学会第九届全国生物无机化学会议摘要集，79.（会议论文）8. “N,O-羧甲基壳聚糖体系中纳米碳酸钙的仿生合成”，应用化学，2006,23:1076.（二类期刊）9. “Effect of Escherichia Coliform on the Nucleation and Growth of Calcium Bilirubinate in Mimic Systems”, Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, 2008, 65(1):11. (JCR 3 区)10. “Synthesis of Calcite with Novel Morphologies and Epitaxial Growth Calcium Bilirubinate (CaBR) on Calcite and: Effects of (DPPC) Monolayer and Dextran”, Crystal Growth & Design, 2009, 9(2): 722-727. (JCR 2 区， IF = 4.2)11. “The growth of calcium bilirubinate crystal induced by biological macromolecule”, Reactive & Functional Polymers, 2007, 67: 241. (IF = 2.2)12. “Synthesis of Controllable-Size Core–Shell Se@Ag and Se@Au Nanoparticles in UV-Irradiated TSA Solution”, European Journal of Inorganic Chemistry, 2007, 1128. (JCR 3 区)13. “Synthesis of Dextran/ Se Nanocomposites for Nanomedicine Application”, Materials Chemistry and Physics, 2008, 109: 534. (JCR 2 区)14. “Formation of calcium oxalate concentric precipitate rings in two-dimensional agar gel systems containing Ca2+–RE3+ (RE = Er, Gd and La)–C2O42?”, Colloids and Surfaces A: Physicochemical and Engineering Aspects, 2009, 332: 192-199. (JCR 3 区)。

3.(6)求论文翻译,急

2.8 。

共聚焦激光扫描显微镜在开始工作，以观察之间的相互作用长白色念珠菌和多肽通过共聚焦激光扫描显微镜，我们要使用fitc标记迪k19hc 。在此之前，微观实验， 我们首先比较了抗真菌活性的fitc标记涤k19hc对白色念珠菌与该非标迪k19hc通过比较殖民地计数检测。

因此， fitc标记迪k19hc 决心没有抗念珠菌活性（数据未显示） 。 因此，我们得出结论认为， fitc受影响的结构，涤k19hc ； 因此fitc标记的物质是不恰当的使用，在这实验。

作为抗血清，以18hc决心交叉反应与迪k19hc ，在免疫印迹分析（图6B型） ，抗血清以18hc聘请，以观察分布迪k19hc 对肽治疗白色念珠菌kctc7122 ，通过共聚焦激光扫描显微镜。一毫升aliquots的白色念珠菌细胞（ 2 108细胞/ 毫升）洗涤3次的PBS ，然后孵育1分钟与100名当地雇员1毫克/毫升迪k19hc在37长经过短暂离心， 丸粒细胞固定为30分钟，在磷酸盐缓冲2.5 %甲醛。

固定细胞，然后冲洗3次的PBS ，孵育30分钟的阻断溶液（ PBS的载有3 %明胶） 水洗广泛的PBS后，他们被孵育1 h后在抗血清稀释（ 1:100 ）与PBS后，载有1 %明胶。在…之后洗涤细胞的3倍，为各10分钟与PBS后，细胞孵育1 h后与fitc共轭山羊抗兔抗体（张灼华面粉488山羊抗兔， Invitrogen公司。

美国）稀释至在1:300的PBS含1 %明胶。后一个额外的洗衣机在PBS的，涤k19hc对白色念珠菌是可视化和本地化的使用激光扫描共聚焦显微镜fv500 （奥林巴斯，日本） 。

4.帮忙翻译下论文摘要,谢谢啦

Abstract: Objective: To explore the black water extracts of the immunosuppressive effect and anti allergic effects, to provide experimental basis for clinical medicine; methods: by low molecular dextran - 40induced systemic pruritus experiment, exogenous histamine induced increase in capillary permeability experiment, black water extracts of normal weight of immunity organs of mice and effect of experiment mouse carbon clearance test, observation of black water extract of autoimmune inhibition and anti allergic effects; results : black water extract in high, low dose group, of low molecular dextran - 40induced systemic pruritus of the frequency and the duration time has significant inhibiting effect, on exogenous histamine induced capillary increased permeability model showed a significant effect of antiallergic, significantly reduced the normal murine immune organ weight, decreased monocyte macrophage phagocytic capacity, reduced clearance index and phagocytic activity; conclusion : black water extract has obvious immune inhibition and anti allergic effects.。

5.(6)求论文翻译,急

2.8 。共聚焦激光扫描显微镜

在开始工作，以观察之间的相互作用长

白色念珠菌和多肽通过共聚焦激光扫描显微镜，我们

要使用fitc标记迪k19hc 。在此之前，微观实验，

我们首先比较了抗真菌活性的fitc标记涤

k19hc对白色念珠菌与该非标迪k19hc通过

比较殖民地计数检测。因此， fitc标记迪k19hc

决心没有抗念珠菌活性（数据未显示） 。

因此，我们得出结论认为， fitc受影响的结构，涤k19hc ;

因此fitc标记的物质是不恰当的使用，在这

实验。作为抗血清，以18hc决心交叉反应

与迪k19hc ，在免疫印迹分析（图6B型） ，抗血清

以18hc聘请，以观察分布迪k19hc

对肽治疗白色念珠菌kctc7122 ，通过共聚焦激光扫描

显微镜。一毫升aliquots的白色念珠菌细胞（ 2 108细胞/

毫升）洗涤3次的PBS ，然后孵育1分钟与

100名当地雇员1毫克/毫升迪k19hc在37长经过短暂离心，

丸粒细胞固定为30分钟，在磷酸盐缓冲2.5 %甲醛。

固定细胞，然后冲洗3次的PBS ，孵育

30分钟的阻断溶液（ PBS的载有3 %明胶）

水洗广泛的PBS后，他们被孵育1 h后

在抗血清稀释（ 1:100 ）与PBS后，载有1 %明胶。在…之后

洗涤细胞的3倍，为各10分钟与PBS后，细胞

孵育1 h后与fitc共轭山羊抗兔抗体

（张灼华面粉488山羊抗兔， Invitrogen公司。美国）稀释至

在1:300的PBS含1 %明胶。后一个额外的洗衣机在

PBS的，涤k19hc对白色念珠菌是可视化和本地化的使用

激光扫描共聚焦显微镜fv500 （奥林巴斯，日本） 。

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