众文网1.免疫组化在医学中的应用?
免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：
(1)恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；
(2)确定转移性恶性肿瘤的原发部位；
(3)对某类肿瘤进行进一步的病理分型；
(4)软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；
(5)发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。
(6)为临床提供治疗方案的选择。
2.免疫组化和 western blot 有什么区别
1、原理不同：
免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。
western blot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应。
2、组织定位不同：
免疫组化在组织定位和定性上比较准确，但是在定量上不够准确。western blot因为有内参标定，所以在定量上要更加准确，但是在组织定位上不如免疫组化。
扩展资料：
一、免疫组化（SP法）操作步骤：
1、切片常规脱蜡至水。如需抗原修复，可在此步后进行。
2、缓冲液洗 3min/2 次。
3、为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色，将切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分钟。
4、缓冲液洗 5min/2 次。
5、滴加 Ultra V Block ， 在室温下孵育 5 分钟以封闭非特异性的背景染色。
6、缓冲液洗 5min/2 次。
7、滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小时。
8、缓冲液洗 5min/2 次。
9、滴加 Primary Antibody Enhancer（增强子），在室温下孵育 20 分钟。
10、缓冲液洗 5min/2 次。
11、滴加 HRP Polymer（酶标二抗） ，在室温下孵育 30 分钟。
12、缓冲液洗 5min/2 次。
13、向 1ml DAB Plus Substrate （或 AEC Plus Substrate） 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen），混匀后滴加到切片上，孵育 3 - 15 分钟。
14、自来水充分冲洗，复染，脱水，透明，封片。
二、western blot操作步骤：
1、SDS-PAGE试剂：见电泳实验。
2、匀浆缓冲液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.0ml;10%SDS 6.0ml；β-巯基乙醇 0.2ml;ddH2O 2.8ml。
3、转膜缓冲液：甘氨酸 2.9g;Tris 5.8g;SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml。
4、0.01M PBS(pH7.4):NaCl 8.0g;KCl 0.2g;Na2HPO4 1.44g;KH2PO4 0.24g；加ddH2O至1000ml。
5、膜染色液：考马斯亮兰 0.2g；甲醇80ml；乙酸2ml;ddH2O118 ml。包被液（5%脱脂奶粉，现配）：脱脂奶粉1.0g 溶于20ml的0.01M PBS中。
6、显色液：DAB 6.0mg;0.01M PBS 10.0ml；硫酸镍胺 0.1ml;H202 1.0μl。
3.免疫组化是什么?什么病人需要做?是常规性的吗?
免疫组化在临床工作的意义
近年来，随着免疫组织化学技术的发展和各种特异性抗体的出现，使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。在常规肿瘤病理诊断中，5%-10%的病例单靠H.E.染色难以作出明确的形态学诊断。尤其是免疫组化在肿瘤诊断和鉴别诊断中的实用价值受到了普遍的认可，其在低分化或未分化肿瘤的鉴别诊断时，准确率可达50%-75%。
免疫组织化学的临床应用主要包括以下几方面：
(1)恶性肿瘤的诊断与鉴别诊断；
(2)确定转移性恶性肿瘤的原发部位；
(3)对某类肿瘤进行进一步的病理分型；
(4)软组织肿瘤的治疗一般需根据正确的组织学分类，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的；
(5)发现微小转移灶，有助于临床治疗方案的确定，包括手术范围的确定。
(6)为临床提供治疗方案的选择。
免疫组化是判定肿瘤是良性恶性的。一般子宫肌瘤术后都会做，没关系的。子宫肌瘤95%都是良性的，不要怕。一切要等切片出来才能定论。
4.免疫组化中用到的post primary是什么意思
免疫组化概念 应用免疫基本原理——抗原抗体反应即抗原与抗体特异性结合原理通化反应使标记抗体显色剂 （荧光素、酶、金属离、同位素） 显色确定组织细胞内抗原（肽蛋白质）其进行定位、定性及定量研究称免疫组织化技术（immunohistochemistry）或免疫细胞化技术（immunocytochemistry） [编辑本段]●免疫组化类 免疫组织化技术按照标记物种类免疫荧光、免疫酶、免疫铁蛋白、免疫金及放射免疫自影等 [编辑本段]●免疫组化实验所用组织细胞标本 实验所用主要组织标本细胞标本两类前者包括石蜡切片（病理片组织芯片）冰冻切片者包括组织印片、细胞爬片细胞涂片 其石蜡切片制作组织标本用、基本于组织形态保存且能作连续切片利于各种染色照观察；能期存档供顾性研究；石蜡切片制作程组织内抗原暴露定影响进行抗原修复免疫组化首选组织标本制作 [编辑本段]●免疫组化实验所用抗体 免疫组化实验用抗体单克隆抗体克隆抗体单克隆抗体B淋巴细胞克隆泌抗体应用细胞融合杂交瘤技术免疫物制备克隆抗体纯化抗原直接免疫物物血所获免疫血清B淋巴细胞克隆所产抗体混合物 ●免疫组化用染色 根据标记物同免疫荧光免疫酶标亲组织化者种物质某种组织具高度亲合力基础检测种敏性更高利于微量抗原（抗体）细胞或亚细胞水平定位其物素—抗物素染色用 [编辑本段]●免疫组化操作步骤 免疫组化（ LP ）操作步骤 ： 1. 切片规脱蜡至水需抗原修复步进行 2. 缓冲液洗 3min/2 3. 降低内源性氧化物酶造非特异性背景染色 ， 切片放 Hydrogen Peroxide Block 孵育 10-15 钟 4. 缓冲液洗 5min/2 5. 滴加 Ultra V Block 室温孵育 5 钟封闭非特异性背景染色 （注：孵育要超 10 钟否则导致特异性染色降低抗稀释液含 5 - 10% 羊血清步省略） 6. 缓冲液洗 5min/2 7. 滴加抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 （具体孵育间温度由试验者终决定） 8. 缓冲液洗 5min/2 9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer（ 增强 ） ， 室温孵育 20 钟 10 .缓冲液洗 5min/2 11 .滴加 HRP Polymer（ 酶标二抗 ） 室温孵育 30 钟 （注： HRP Polymer 光敏应避免必要光暴露并储存透明瓶） 12 .缓冲液洗 5min/2 13 .向 1ml DAB Plus Substrate （ 或 AEC Plus Substrate） 滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen （或 AEC Plus Chromogen ） ， 混匀滴加切片孵育 3 - 15 钟（具体间由染色深浅决定） 14 .自水充冲洗 ， 复染脱水 ， 透明 ， 封片 二.免疫组化 （ 三步 ） 操作步骤 ： （ 1 ）、石蜡切片脱蜡至水 （ 2 ）、3%H 2 O 2 室温孵育 5-10 钟消除内源性氧化物酶性 （ 3 ）、蒸馏水冲洗 PBS 浸泡 5 钟 x2 （需抗原修复步进行） （ 4 ）、5-10% 山羊血清（ PBS 稀释）封闭室温孵育 10 钟倾血清勿洗滴加 抗 工作液 37 ℃ 孵育 1-2 或 4 ℃ 夜 （ 5 ）、PBS 冲洗 5 钟 x3 ( 6 )、滴加适量 物素标记二抗 工作液 37 ℃ 孵育 10-30 钟 （ 7 ）、PBS 冲洗 5 钟 x3 ( 8 )、滴加适量 辣根酶或碱性磷酸酶标记链霉卵白素 工作液 37 ℃ 孵育 10-30 钟 （ 9 ）、PBS 冲洗 5 钟 x3 ( 10 )、显色剂显色 3-15 钟（ DAB 或 NBT/BCIP ） ( 11 )、自水充冲洗复染脱水透明封片 三. 冰冻切片免疫组化染色步骤： 冰冻切片 4-8um 室温放置 30 钟入 4 ℃丙酮固定 10钟PBS洗5钟x3用氧化氢孵育5-10钟消除内源性氧化物酶性 [编辑本段]●免疫组化实验结判定析 实验结言免疫组化技术服务主要涉及抗体实验结描述与析图片确定与选取相关数据提供述工作免疫组化工作重点内容严格实验设计标准实验操作专业化结析才能更满足客户要求点于形式腹水清培养液类抗体显更重要关于述服务内容应该实验始前由双明确般言客户实验前应提需要结与析例简要详细描述实验结需要实验数据否图片数量与规格等双盲试验或第三参与则事先申明 [编辑本段]●免疫组化临床工作意义 近随着免疫组织化技术发展各种特异性抗体现使许疑难肿瘤明确诊断规肿瘤病理诊断5%-10%病例单靠H.E.染色难作明确形态诊断尤其免疫组化肿瘤诊断鉴别诊断实用价值受普遍认其低化或未化肿瘤鉴别诊断准确率达50%-75% 免疫组织化临床应用主要包括几面： （1）恶性肿瘤诊断与鉴别诊断； （2）确定转移性恶性肿瘤原发部位； （3）某类肿瘤进行进步病理型； （4）软组织肿瘤治疗般需根据确组织类其种类、组织形态相像难区其组织源应用种标志进行免疫组化研究软组织肿瘤诊断缺少； （5）发现微转移灶助于临床治疗案确定包括手术范围确定 （6）临床提供治疗案选择。
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