众文网1.本人急需三篇高效液相色谱法的论文
本实验建立了一种灵敏、准确的高效液相色谱法，此方法可用于缬沙坦的血药浓度测定及人体药代动力学的研究。1材料与方法 1.1仪器与试药 Waters高效液相色谱仪，包括616泵，717自动进样器，447荧光检测器，Millennium2010色谱管理系。
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作者：卢来春，张蓉，刘同华，蒋学文 毕业论文 【摘要】 目的： 采用反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶。本文考察了异丙托溴铵含量的HPLC测定方法，为制剂的质量控制提供了方法学依据。1 仪器与材料 LC?10ATvp高。
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本文建立了反相高效液相色谱法测定呋苄西林钠的含量及有关物质，其专属性强，重现性好，操作简便。；；； 1； 仪器和试药 ；；； 1.1； 仪器 ；；； Agilent 1100高效液相色谱仪系列，包括四元泵、可变波长检测器、自动进样器和ChemStation。
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2.求 高效液相色谱法 论文
高效液相色谱法是在经典色谱法的基础上，引用了气相色谱的理论，在技术上，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9´107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。
特点 1.高压：液相色谱法以液体为流动相（称为载液），液体流经色谱柱，受到阻力较大，为了迅速地通过色谱柱，必须对载液施加高压。一般可达150~350*105Pa。
2. 高速：流动相在柱内的流速较经典色谱快得多，一般可达1~10ml/min。高效液相色谱法所需的分析时间较之经典液相色谱法少得多，一般少于 1h 。
3. 高效：近来研究出许多新型固定相，使分离效率大大提高。 4.高灵敏度：高效液相色谱已广泛采用高灵敏度的检测器，进一步提高了分析的灵敏度。
如荧光检测器灵敏度可达10-11g。另外，用样量小，一般几个微升。
5.适应范围宽：气相色谱法与高效液相色谱法的比较：气相色谱法虽具有分离能力好，灵敏度高，分析速度快，操作方便等优点，但是受技术条件的限制，沸点太高的物质或热稳定性差的物质都难于应用气相色谱法进行分析。而高效液相色谱法，只要求试样能制成溶液，而不需要气化，因此不受试样挥发性的限制。
对于高沸点、热稳定性差、相对分子量大（大于 400 以上）的有机物（这些物质几乎占有机物总数的 75% ~ 80% ）原则上都可应用高效液相色谱法来进行分离、分析。 据统计，在已知化合物中，能用气相色谱分析的约占20%，而能用液相色谱分析的约占70~80%。
高效液相色谱按其固定相的性质可分为高效凝胶色谱、疏水性高效液相色谱、反相高效液相色谱、高效离子交换液相色谱、高效亲和液相色谱以及高效聚焦液相色谱等类型。用不同类型的高效液相色谱分离或分析各种化合物的原理基本上与相对应的普通液相层析的原理相似。
其不同之处是高效液相色谱灵敏、快速、分辨率高、重复性好，且须在色谱仪中进行。 高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 根据分离机制的不同，高效液相色谱法可分为下述几种主要类型： 1 .液 — 液分配色谱法（Liquid-liquid Partition Chromatography）及化学键合相色谱（Chemically Bonded Phase Chromatography） 流动相和固定相都是液体。
流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。
达到平衡时，服从于下式： 式中，cs—溶质在固定相中浓度；cm--溶质在流动相中的浓度； Vs—固定相的体积；Vm—流动相的体积。LLPC与GPC有相似之处，即分离的顺序取决于K,K大的组分保留值大；但也有不同之处，GPC中，流动相对K影响不大，LLPC流动相对K影响较大。
a. 正相液 — 液分配色谱法（Normal Phase liquid Chromatography）： 流动相的极性小于固定液的极性。 b. 反相液 — 液分配色谱法（Reverse Phase liquid Chromatography）： 流动相的极性大于固定液的极性。
c. 液 — 液分配色谱法的缺点：尽管流动相与固定相的极性要求完全不同，但固定液在流动相中仍有微量溶解；流动相通过色谱柱时的机械冲击力，会造成固定液流失。上世纪70年代末发展的化学键合固定相（见后），可克服上述缺点。
现在应用很广泛（70~80%）。 2 .液 — 固色谱法 流动相为液体，固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝等）。
这是根据物质吸附作用的不同来进行分离的。其作用机制是：当试样进入色谱柱时，溶质分子 （X） 和溶剂分子（S）对吸附剂表面活性中心发生竞争吸附（未进样时，所有的吸附剂活性中心吸附的是S），可表示如下： Xm + nSa ====== Xa + nSm 式中：Xm--流动相中的溶质分子；Sa--固定相中的溶剂分子；Xa--固定相中的溶质分子；Sm--流动相中的溶剂分子。
当吸附竞争反应达平衡时： K=[Xa][Sm]/[Xm][Sa] 式中：K为吸附平衡常数。[讨论：K越大，保留值越大。
] 3 .离子交换色谱法（Ion-exchange Chromatography） IEC是以离子交换剂作为固定相。IEC是基于离子交换树脂上可电离的离子与流动相中具有相同电荷的溶质离子进行可逆交换，依据这些离子以交换剂具有不同的亲和力而将它们分离。
以阴离子交换剂为例，其交换过程可表示如下： X-（溶剂中） + （树脂-R4N+Cl-）=== （树脂-R4N+ X-） + Cl- （溶剂中） 当交换达平衡时： KX=[-R4N+ X-][ Cl-]/[-R4N+Cl-][ X-] 分配系数为： DX=[-R4N+ X-]/[X-]= KX [-R4N+Cl-]/[Cl-] [讨论：DX与保留值的关系] 凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。 4 .离子对色谱法（Ion Pair Chromatography） 离子对色谱法是将一种 （ 或多种 ） 与溶质分子电荷相反的离子 （ 称为对离子或反离子 ） 加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。
其原理可用下式表示： X+水相 + Y-水相 === X+Y-有机相 式中：X+水相--流动相中待分离的有机离子（也可是阳离子）；Y-水相--流动相中带相反电荷的离子对（如氢氧化四丁基铵、氢氧化十六烷基三甲铵等）；X+Y---形成的。
3.求液相色谱质谱联用技术在环境污染物分析中的应用的论文5000字左右
反相高效液相色谱法测定人血浆中单硝酸异山梨酯的浓度 论文 单硝酸异山梨酯（isosorbide mononitrate,ISMN）为硝酸异山梨酯的主要活性代谢产物。
可通过扩张外周血管，特别是增加静脉血容量，减少回心血量，降低心脏前后负荷，从而减少心肌耗氧量；同时还可以促进心肌血流重新分布，改善缺血区血流供应，单硝酸异山梨酯可能通过这两方面发挥抗心肌缺血作用。目前国内复方单硝酸异山梨酯缓释片上市不久，为考察其相对生物利用度及了解药代动力学参数，本文建立了测定血浆中单硝酸异山梨酯的反相高效液相色谱法。
有关血中单硝酸异山梨酯的测定，文献报道有气相色谱-电子捕获法[1~3]，高效液相色谱法[4~6]，而反相高效液相色谱法报道少见。本研究建立简单、灵敏、准确的RP-HPLC法，可广泛用于复方单硝酸异山梨酯缓释制剂生物利用度和药代动力学的测定以及治疗药物监测。
1 仪器与试药 1.1 仪器 Agilent-1100高效液相色谱分析仪，配备G1313A自动进样器和G1315BDAD检测器，Agilent色谱工作站。 1.2 色谱条件 色谱柱：预柱Ultrasphere C18柱（5 μm,4.6 mm*45 mm），分析柱Ultrasphere C18柱（5 μm,4.6 mm*250 mm）；流动相：甲醇-正己烷-乙腈（90∶6∶4,pH=7.4），流速1.0 mL/min；检测波长220 nm，灵敏度为0.01 AUFS。
1.3 药品与试剂 单硝酸异山梨酯（河南天方药业有限公司）；卡马西平（中国药品生物制品检定所）。乙腈、正己烷为色谱纯，甲醇为分析纯。
1.4 标准溶液 准确称取单硝酸异山梨酯10.0 mg及卡马西平10.0 mg，分别置于2个50 ml容量瓶中，加乙腈溶解并定容至刻度即成单硝酸异山梨酯和内标卡马西平贮备液（200 mg/L）,-20 ℃保存可稳定2个月，临用时将贮备液用重蒸水稀释至所需浓度，即得单硝酸异山梨酯系列工作液（8000,4000,2000,1000,500,250,125 μg/L）和内标稀释液（126 μg/L）。 2 方法与结果 2.1 标准曲线 取正常人空白血浆各0.5 ml共7份，分别加入单硝酸异山梨酯标准系列工作液100 μl，使各管血浆浓度分别为1600,800,400,200,100,50,25 μg/L，再分别加入内标稀释液100 μl,0.25 mol/L氢氧化钠溶液100 μl，混匀后用乙醚5.0 ml涡旋混合萃取3 min，离心（2500 r/min）10 min，小心将有机相4 ml移至另一尖底离心管内，置于40 ℃水浴中氮气吹干，残渣溶于100 μl流动相，取20 μl进样。
由单硝酸异山梨酯与卡马西平的峰面积比（Y）对单硝酸异山梨酯浓度（X）作标准曲线，计算得回归方程为：Y=0.2297+0.5586 X(r=0.999,n=7)，表明在血药浓度25~1600 μg/L范围内有良好线性关系。 2.2 样品测定 取受试者血浆样品0.5 ml，加入重蒸水100 μl，按标准曲线制备项下操作，在标准曲线上求出各样品中单硝酸异山梨酯浓度。
2.3 保留时间及检测限 空白及样品血浆色谱图（见图1）中单硝酸异山梨酯及内标卡马西平的保留时间分别为6.8 min和8.4 min（分离度为2.0）。单硝酸异山梨酯的最低检出量为2 ng，最低检出浓度为10 μg/L（以信噪比≥3计）。
2.4 方法精密度 取含单硝酸异山梨酯高、中、低3种浓度的样品，于同日内连续测定5次，精密度分别为1.5%、2.06%、3.10%;4日内重复测定5次，精密度分别为3.61%、3.98%、4.27%。 2.5 方法回收率 取空白血浆3份，配成含单硝酸异山梨酯高、中、低3种浓度的样品，每个浓度样品分成5份按前述样品测定法测定，计算方法回收率分别为97.0%、98.1%、102.1%。
图1 色谱图 略 3 讨论 3.1 检测波长选择 单硝酸异山梨酯无明显紫外吸收峰，仅在近紫外区有吸收（见图2），为提高检测灵敏度，检测波长应越短越好，但由于流动相在近紫外区吸收明显增高，综合二者因素，本文采用220 nm测定既不使流动相本底吸收太高（本底吸收值0.50），又能达到测定血浆中单硝酸异山梨酯灵敏度要求。 图2 单硝酸异山梨酯紫外吸收曲线 略 3.2 萃取条件选择 按赵弈等报道[3]，在pH 7.0缓冲液存在下用乙酸乙酯提取，紫外检测杂质峰较多。
本文用乙醚提取，回收率与乙酸乙酯相当，但杂质峰较少，且在碱性条件下提取比中性条件下杂质峰更少。 本文建立的测定血浆中单硝酸异山梨酯的反相高效液相色谱法具有操作简便、灵敏、准确等特点，能满足药代动力学和生物利用度研究的需要，已用于复方单硝酸异山梨酯缓释片的生物利用度和药代动力学的测定以及治疗药物监测（待发表），结果准确可靠，为单硝酸异山梨酯人血浆中浓度测定提供了一种新的选择。
4.气相色谱方面的论文
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色谱法又称色谱分析、色谱分析法、层析法，是一种分离和分析方法，在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。
色谱法起源于20世纪初，1950年代之后飞速发展，并发展出一个独立的三级学科——色谱学。历史上曾经先后有两位化学家因为在色谱领域的突出贡献而获得诺贝尔化学奖，此外色谱分析方法还在12项获得诺贝尔化学奖的研究工作中起到关键作用。
目录[隐藏] * 1 历史 o 1.1 色谱的起源 o 1.2 分配色谱的出现和色谱方法的普及 o 1.3 气相色谱和色谱理论的出现 o 1.4 高效液相色谱 * 2 原理 o 2.1 吸附色谱 o 2.2 分配色谱 o 2.3 离子交换色谱 o 2.4 凝胶色谱 * 3 色谱理论 o 3.1 关于保留时间的理论 o 3.2 基于热力学的塔板理论 o 3.3 基于动力学的Van Deemter方程 * 4 基本技术和方法 * 5 应用 * 6 发展方向 o 6.1 新固定相的研究 o 6.2 检测方法的研究 o 6.3 专家系统 o 6.4 色谱新方法 * 7 参见[编辑]历史[编辑]色谱的起源色谱法起源于20世纪初，1906年俄国植物学家米哈伊尔·茨维特用碳酸钙填充竖立的玻璃管，以石油醚洗脱植物色素的提取液，经过一段时间洗脱之后，植物色素在碳酸钙柱中实现分离，由一条色带分散为数条平行的色带。由于这一实验将混合的植物色素分离为不同的色带，因此茨维特将这种方法命名为Хроматография，这个单词最终被英语等拼音语言接受，成为色谱法的名称。
汉语中的色谱也是对这个单词的意译。茨维特并非著名科学家，他对色谱的研究以俄语发表在俄国的学术杂志之后不久，第一次世界大战爆发，欧洲正常的学术交流被迫终止。
这些因素使得色谱法问世后十余年间不为学术界所知，直到1931年德国柏林威廉皇帝研究所的库恩将茨维特的方法应用于叶红素和叶黄素的研究，库恩的研究获得了广泛的承认，也让科学界接受了色谱法，此后的一段时间内，以氧化铝为固定相的色谱法在有色物质的分离中取得了广泛的应用，这就是今天的吸附色谱。[编辑]分配色谱的出现和色谱方法的普及薄层色谱分离打印机黑色油墨的组成放大薄层色谱分离打印机黑色油墨的组成1938年阿切尔·约翰·波特·马丁和理查德·劳伦斯·米林顿·辛格准备利用氨基酸在水和有机溶剂中的溶解度差异分离不同种类的氨基酸，马丁早期曾经设计了逆流萃取系统以分离维生素，马丁和辛格准备用两种逆向流动的溶剂分离氨基酸，但是没有获得成功。
后来他们将水吸附在固相的硅胶上，以氯仿冲洗，成功地分离了氨基酸，这就是现在常用的分配色谱。在获得成功之后，马丁和辛格的方法被广泛应用于各种有机物的分离。
1943年马丁以及辛格又发明了在蒸汽饱和环境下进行的纸色谱法。[编辑]气相色谱和色谱理论的出现1952年马丁和詹姆斯提出用气体作为流动相进行色谱分离的想法，他们用硅藻土吸附的硅酮油作为固定相，用氮气作为流动相分离了若干种小分子量挥发性有机酸。
气相色谱的出现使色谱技术从最初的定性分离手段进一步演化为具有分离功能的定量测定手段，并且极大的刺激了色谱技术和理论的发展。相比于早期的液相色谱，以气体为流动相的色谱对设备的要求更高，这促进了色谱技术的机械化、标准化和自动化；气相色谱需要特殊和更灵敏的检测装置，这促进了检测器的开发；而气相色谱的标准化又使得色谱学理论得以形成色谱学理论中有着重要地位的塔板理论和Van Deemter方程，以及保留时间、保留指数、峰宽等概念都是在研究气相色谱行为的过程中形成的。
[编辑]高效液相色谱1960年代，为了分离蛋白质、核酸等不易汽化的大分子物质，气相色谱的理论和方法被重新引入经典液相色谱。1960年代末科克兰、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪，开启了高效液相色谱的时代。
高效液相色谱使用粒径更细的固定相填充色谱柱，提高色谱柱的塔板数，以高压驱动流动相，使得经典液相色谱需要数日乃至数月完成的分离工作得以在几个小时甚至几十分钟内完成。1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书，标志着高效液相色谱法 （HPLC）正式建立。
在此后的时间里，高效液相色谱成为最为常用的分离和检测手段，在有机化学、生物化学、医学、药物开发与检测、化工、食品科学、环境监测、商检和法检等方面都有广泛的应用。高效液相色谱同时还极大的刺激了固定相材料、检测技术、数据处理技术以及色谱理论的发展。
[编辑]原理色谱过程的本质是待分离物质分子在固定相和流动相之间分配平衡的过程，不同的物质在两相之间的分配会不同，这使其随流动相运动速度各不相同，随着流动相的运动，混合物中的不同组分在。
5.液相色谱法
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1.对仪器的一般要求 所用的仪器为高效液相色谱仪。色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定.常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。
后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料，用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升，除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。
在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法（附录Ⅳ A）项下的对溶剂的要求。 正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变， 以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。
一般色谱图约于20分钟内记录完毕。 2.色谱条件与系统适用性试验 按各品种项下的要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子。
（1） 色谱柱的理论板数（n） 在选定的条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和半高峰宽（Wh/2），按n=5.54(tR/Wh/2)计算色谱柱的理论板数，如果测得理论板数低于各品种项下规定的最小理论板数，应改变色谱柱的某些条件（如柱长，载体性能，色谱柱充填的优劣等），使理论板数达到要求。 （2） 分离度 定量分析时，为便于准确测量，要求定量峰与其他峰或内标峰之间有较好的分离度。
分离度（R）的计算公式为： 2(tR-tR) R=—————————— W+W 式中 tR为相邻两峰中后一峰的保留时间； tR为相邻两峰中前一峰的保留时间； W及W为此相邻两峰的峰宽。 除另外有规定外，分离度应大于1.5。
(3) 拖尾因子 为保证测量精度，特别当采用峰高法测量时，应检查待测峰的拖尾因子（T）是否符合各品种项下的规定，或不同浓度进样的校正因子误差是否符合要求。拖尾因子计算公式为： W T=—————— 2d 式中 W为0.05峰高处的峰宽； d为峰极大至峰前沿之间的距离。
除另有规定外，T应在0.95~1.05间。 也可按各品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别注样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差应不大于2.0%。
3.测定法 定量测定时，可根据样品的具体情况采用峰面积法或峰高法。但用归一法或内标法测定杂质总量时，须采用峰面积法。
（1） 面积归一化法 测定供试品（或经衍生化处理的供试品）中各杂质及杂质的总量限度采用不加校正因子的峰面积归一法。计算各杂质峰面积及其总和，并求出占总峰面积的百分率。
但溶剂峰不计算在内。色谱图的记录时间应根据各品种所含杂质的保留时间决定，除另有规定外，可为该品种项下主成分保留时间的倍数。
（2） 主成份自身对照法 当杂质峰面积与成分峰面积相差悬殊时，采用主成分自身对照法。在测定前，先按各品种项下规定的杂质限度，将供试品稀释成一定浓度的溶液作为对照溶液，进样，调节检测器的灵敏度或进样量，使对照溶液中的主成分色谱峰面积满足准确测量要求。
然后取供试品溶液，进样，记录时间，除另有规定外，应为主成分保留时间的倍数。根据测得的供试品溶液的各杂质峰面积及其总和并和对照溶液主成分的峰面积比较，计算杂质限度。
（3） 内标法测定供试品中杂质的总量限度 采用不加校正因子的峰面积法。取供试品，按各品种项下规定的方法配制不含内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图I；再配制含有内标物质的供试品溶液，在同样的条件下注样，记录色谱图Ⅱ。
记录的时间除另有规定外，应为该品种项下规定的内标峰保留时间的。